WWW.KONFERENCIYA.SELUK.RU

БЕСПЛАТНАЯ ЭЛЕКТРОННАЯ БИБЛИОТЕКА - Конференции, лекции

 

Pages:     | 1 || 3 | 4 |

«Министерство сельского хозяйства Российской Федерации ФГОУ ВПО Ульяновская государственная сельскохозяйственная академия Всероссийский совет молодых учёных и специалистов аграрных ...»

-- [ Страница 2 ] --

Нами изучены органолептические и физические показатели (внешний вид, цвет, запах, вкус, размер частиц, наличные примеси), химический состав (массовая доля влаги, белка, жира, углеводов, минеральных веществ) и функциональнотехнологические (влагоудерживающая способность, жироудерживающая способность, пенообразующая способность, стабильность пены) и микробиологические показатели ихтиожелатина (количество мезофильных аэробных микроорганизмов (КМАФАнМ), наличие бактерий группы кишечной палочки (БГКП), патогенной микрофлоры.

Органолептические и физические показатели оценивали в соответствии с нормативной документацией. Результаты исследований показали, что готовый ихтиожелатин является качественным, соответствует требованиям ГОСТ 11293- Том 3. Актуальные вопросы микробиологии, вирусологии, эпизоотологии и биотехнологии «Желатин»: полученный продукт имеет внешний вид – порошок, цвет – светложелтый до кремового, без постороннего вкуса и запаха, размер частиц – 2–3мм, наличие примесей – не обнаружены. Ихтиожелатин обладает хорошей желирующей способностью и высокой вязкостью, динамическая вязкость 10% раствора не менее 25 мПа.С. Прозрачность раствора ихтиожелатина с массовой долей 5% составляет более 50%. Водные растворы ихтиожелатина при охлаждении образуют плотный, упругий студень, при нагревании переходят в раствор.

Химические показатели полученного ихтиожелатина определяли стандартными методами по ГОСТ 7636 «Рыба, морские млекопитающие, морские беспозвоночные и продукты их переработки». Результаты исследований представлены в таблице 1.

Из таб.1 видно, что ихтиожелатин обладает высоким качеством. Содержание белков коллагеного характера в готовом продукте достигает 90,99%, содержание минеральных веществ и жира незначительно.

В данной работе были определены водо- и жироудерживающая способность методом центрифугирования [4]. Пенообразующую способность и стойкость пены ихтиожелатина определяли растворением навески в воде, взбалтыванием и замером высоты пены [1].

Анализ функционально-технологических свойств показал, что полученный ихтиожелатин характеризуется высокой способностью удерживать влагу и жир.

Влагоудерживающая способность составляет до 500%, жироудерживающая достигает 300%, пенообразующая способность не менее 75%. Образующая пена имеет высокую стабильность.

Микробиологические показатели определяли общепринятыми методами в соответствии с Инструкцией по санитарно - микробиологическому контролю производства пищевой продукции № 5319-91 и ГОСТ 11293-89 [2]. Результаты исследований представлены в таблице 2.

Микробиологические показатели ихтиожелатина Мезофильные аэробные и факультативноанаэробные м/о, КОЕ, в 1г желатина не более Бактерии группы кишечных палочек (колиформные) Из полученных результатов, представленных в таб.2, видно, что количество мезофильных аэробных и факультативно-анаэробных микроорганизмов (КМАФАнМ) в 1г продукта составляют 2*104 КОЕ, что ниже данных предусмотренных стандартом для пищевого желатина. Бактерии группы кишечной палочки (БГКП) и патогенная микрофлора отсутствуют.

Из результатов проведенных исследований следует, что полученный ихтиожелатин из кожи рыб по разработанному способу имеет высокие Том 3. Актуальные вопросы микробиологии, вирусологии, эпизоотологии и биотехнологии органолептические показатели, химический состав с высшим содержанием белка коллагеного характера, обладает рядом ценных функционально-технологических свойств, по микробиологическим показателям не превышает допустимых стандартом норм. В связи с этом можно сделать вывод о том, что использование отходов рыбоперерабатывающих предприятий Вьетнама и Волго-Каспийского бассейна позволит решить проблему утилизации и рационального использования сырья и получить желатин, имеющий широкий спектр использования, а имено применяться как структурообразователь в пищевой промышленности, в медицинских и фотографических целях, использоваться для приготовления микробиологических сред, осветления виноматериалов, напитков и в других целях.

1. ГОСТ 7636-85. Рыба и продукты переработки рыбы и морских млекопитающих. Методы химического и физического исследования.

2. ГОСТ 11293-89. Желатин. Технические условия.

3. Сколков, С.А. Разработка технологии кожи из шкур рыб Волго-Каспийского бассейна [текст]. Автореф. дис. на соиск. канд. тех. наук: 05.18.04/ Сколков 4. Щербаков, В. Г., Иваницкий, С. Б. Производство белковых продуктов из масличных семян [текст]. – М.: Агропромиздат, 1987. – 152 с.

УДК 619:

КУЛЬТИВИРОВАНИЕ СУЛЬФАТРЕДУЦИРУЮЩИХ БАКТЕРИЙ НА ПЛОТНЫХ

СРЕДАХ

CULTIVATION OF SULFATE-REDUCING BACTERIA ON SOLID MEDIA

N.N. Karamysheva, A.G. Shestakov, D.A. Vasilyev Научно-исследовательский инновационный центр микробиологии и The research innovation centre of microbiology and biotechnology Resulis of working out of the scheme of allocation and identification of bacteria of kind Desulfovibrio desulfuricans are described. The presented scheme of allocation allows to define in current 96 hours bacteria of this kind.

Сульфатредукция – процесс восстановления минеральных солей сульфатов 2SO4 ). Этот микробиолгический процесс является одним из важнейших в круговороте серы на земной поверхности. Этот процесс был открыт русским химиком Н. Д. Зелинским в 1890—1893 гг. Сульфатредукция происходит повсеместно в пресных и соленых водоемах, в болотах, вулканических кратерах, в кишечнике теплокровных животных и т.п. Основная масса сероводорода на планете сульфатредуцирующих бактерий была выделена Бейеринком в 1895 г.



Сероводород - токсическое вещество и сильный восстановитель, при окислении которого в воде и иловых отложениях поглощается кислород, и образуются анаэробные зоны. Кроме того, смещение электрохимического потенциала в кислую сторону приводит к порче промышленного оборудования и вызывает коррозии металлов.

Несмотря на широкое распространение сульфатредуцирующих бактерий и разработанные методы индикации и идентификации группы этих бактерий в Том 3. Актуальные вопросы микробиологии, вирусологии, эпизоотологии и биотехнологии исследуемых субстратах, остается проблема определения видовой принадлежности бактериологическими методами. Связано это с тем, что бактерии сульфатредуцирующей группы являются, в большинстве своем, анаэробами и, осуществляя сульфатное дыхание, обеспечивающее минимальное количество энергии в сравнении с аэробным окислением субстратов, имеют продолжительный период культивирования. Культивирование некоторых видов бактерий, осуществляющих сульфатное дыхание, в среднем продолжается от 3 до 14 суток (Yumi A. Warren, 2005, Toshifumi Sakaguchi, Atsushi Arakaki and Tadashi Matsunaga, 2002). Идентификация бактерий сульфатредуцирующей группы основана в основном на использовании жидкой среды Постгейта В в различных ее модификациях, а также среды В3(США) (Sergey Stolyar, 2007).

Мы поставили перед собой задачи разработать плотную дифференциальнодиагностическую среду для обнаружения и визуализации колоний сульфатредуцирующих бактерий.

Выделение чистых штаммов сульфатредуцирующих бактерий и изучение их биологических свойств.

В работе использовались основные методы работы с анаэробными микроорганизмами по Постгейту и Кембеллу (Campbell, Postgate,1965; Postgate, Campbell, 1966). Культуры аэробных микроорганизмов Pseudomonas aeruginosa.

Пробы технической воды, закачиваемой в нефтяной пласт, и придонного ила с предполагаемым наличием бактерий сульфатредуцирующей группы.

Первоначально исследуемые пробы засевали на среду Постгейта В.

Калий фосфорнокислый однозамещенный КН2РО4 – 0,5 г ГОСТ 4198- Кальций сернокислый 2-водный СаSО42H2O – 1,0 г Магний сернокислый 7-водный MgSO47H2O – 2,0 г Все реактивы основной среды растворяют в 1 л водопроводной воды. Вносили добавки:

Железо (II) сернокислое 7-водное FeSO47H2O – 0,5 г Натрий сернистый 9-водный Na2S9H2O Стерилизацию основной среды, добавок и других материалов проводили насыщенным водяным паром при давлении выше атмосферного в специально предназначенных для этого автоклавах.

Основную среду и добавки разливали в колбы не выше, чем на половину объема колбы и закрывали ватными пробками и бумажными колпачками.

Стерилизацию основной среды проводили в автоклаве при избыточном давлении 0, МПа (температура 1202 С), а добавок – при избыточном давлении 0,05 МПа.

Время стерилизации должно составлять 30 мин.

Среда Постгейта В готовилась по прописи, затем разливалась в пробирки, остужалась до 400С. После внесения проб, а также контрольная (не засеянная) пробирки закрывались резиновыми пробками и резко охлаждались под струей холодной воды. Культивирование проводили при 32 0С в течение 4 суток.

После почернения осадка, которое происходит под воздействием образования сульфата железа в среде Постгейта В, изучали тинкториальные свойства образовавшегося осадка.

Далее из пробирок с почерневшей средой Постгейта В, по методу Дригальского, произведен посев на сконструированную нами плотную среду Том 3. Актуальные вопросы микробиологии, вирусологии, эпизоотологии и биотехнологии следующего состава: сульфат железа, лактат, минеральные соли, агар-агар и аскорбиновую кислоту, для уменьшения парциального давления кислорода в среде.

В анаэробных условиях посевы на плотной среде культивировали, используя модифицированный нами метод Фортнера. На дно чашки Петри заливали мясопептонный агар и давали ему застыть в ламинарном шкафу. В крышку чашки Петри также заливали мясопептонный агар. После застывания дно чашки засевали исследуемой пробой, а середину мясопептонного агара в крышке чашки культурой бактерий Pseudomonas aeruginosa. После посева дно прикладывали к крышке и прижимали, при этом удаляя остатки агара из крышки. После прижатия пространство в крышке чашки Петри заливали стерильным парафином, с целью создания герметичности. Параллельно ставили контроль: чашки, засеянные пробой без сплошного газона культуры Pseudomonas aeruginosa. Чашку, засеянную только газоном Pseudomonas aeruginosa, и не засеянную чашку, а также чашку с культурой Pseudomonas aeruginosa в аэробных условиях. Суть метода заключается в том, что аэробная бактерия Pseudomonas aeruginosa используя кислород, в первые 12 часов роста, создает анаэробные условия, в которых могут развиваться строгие анаэробы, а слой парафина препятствует проникновению кислорода в чашку Петри.

Засеянные таким образом чашки инкубировали в термостате при температуре 300С, в течение 96 часов (4 дня). Спустя 96 часов чашки были вскрыты. Во всех чашках, наблюдался скудный рост газона бактерий Pseudomonas aeruginosa по сравнению с контролем. Из имеющихся проб ила и технической воды на сконструированной нами среде мы получили 4 типа колоний, растущих в анаэробных условиях и меняющих цвет среды с серого на черный, за счет восстановления соли железа. Далее мы отвивали колонии на жидкую среду и исследовали возможность роста этих бактерий в аэробных условиях – результат отрицательный.





Таким образом, разработана минеральная дифференциальнодиагностическая среда для культивирования сульфатредуцирующих бактерий в анаэробных условиях. Получены культуры сульфатредуцирующих бактерий.

1. Biochemical Differentiation and Comparison of Desulfovibrio Species and Other Phenotypically Similar Genera.

2. Yumi A. Warren, Diane M. Citron, C. Vreni Merriam, and Ellie J. C. Goldstein Journal of Clinical Microbiology, August 2005, p. 4041-4045, Vol. 43, No. 8.

3. Desulfovibrio magneticus sp. nov., a novel sulfate-reducing bacterium that produces intracellular single-domain-sized magnetite particles Toshifumi Sakaguchi, Atsushi Arakaki and Tadashi Matsunaga International Journal of Systematic and Evolutionary Microbiology (2002), 52, 215–221.

4. Response of Desulfovibrio vulgaris to Alkaline Stress. Sergey Stolyar, Qiang He, Marcin P. et al. JOURNAL OF BACTERIOLOGY, Dec. 2007, p. 8944–8952.

Том 3. Актуальные вопросы микробиологии, вирусологии, эпизоотологии и биотехнологии УДК 664.

ПОВЫШЕНИЕ АКТИВНОСТИ ХЛЕБОПЕКАРНЫХ ДРОЖЖЕЙ

INCREASE OF ACTIVITY OF BAKING YEAST

ГОУ ВПО «Самарский Государственный Технический Университет»

The technology of introducing various activators into baking yeast for activity increase was developed.

В настоящее время промышленное производство дрожжей испытывает серьёзные трудности, связанные с изменением состава сырья. В качестве сырья для приготовления питательной среды традиционно является меласса - отход производства свекловичного сахара. Целый ряд изменений в технологии переработки и в агротехнике выращивания свёклы - применение генной инженерии, пестицидов, удобрений привели к изменению свойств мелассы. Это существенно сказалось на процессе культивирования дрожжей: разработанная ранее технология в новых условиях уже не позволяет получать удовлетворительные результаты.

Дрожжи получаются с меньшим выходом и более низкого качества - потребители отмечают ухудшение сбраживающей способности микроорганизмов, снижение качества выпечки хлеба.

Поэтому актуальной задачей является исследование всех возможных способов стимулирования наращивания дрожжевой биомассы и их хлебопекарных свойств.

Эффективным направлением такой работы является применение в производстве дрожжей различных стимулирующих добавок для культуральной жидкости на основе мелассы. По литературным сведениям, с этой целью могут найти применение с этой целью различные биологически активные вещества природного и искусственного происхождения. Добавками могут служить стимуляторы дыхательного цикла Кребса, антиоксиданты, питательные вещества, например, экстракты водорослей (Спирулина Платенсис), соки и экстракты плодов (яблок, облепихи), некоторые синтетические химические реактивы (янтарная кислота), отход производства кисломолочных продуктов - молочная сываротка.

дрожжерастительного эффекта, а также мальтазной и зимазной активности дрожжей с применением перечисленных здесь добавок в условиях Самарского Дрожжевого завода СГООИ «СИЛК». Разработаны рекомендации по использованию стимулирующих добавок на разных этапах производства.

В качестве объекта исследования был принят используемый в производстве СГООИ «СИЛК» австрийский штамм Saccharomyces cerevisiae. Для исследования кинетики роста микроорганизмов определяли концентрацию биомассы в пробе фотометрическим методом на фотометре при длине волны 600 нм. Мальтазная и зимазная активность дрожжей определялась стандартными способами «по методу шарика» и с помощью прибора Елецкого.

Используемое для культивирования мелассное сусло предварительно стерилизовалось. После этого в питательную среду вносили инокулят дрожжей (по мл) и различные стимуляторы роста. В каждом эксперименте проводился контрольный опыт (по три колбы) без применения каких-либо добавок.

Культивирование проводили без аэрации с термостатированием при 30°С и периодическом обследовании образцов для определения концентрации выращиваемых клеток. По окончании процесса культивирования полученные Том 3. Актуальные вопросы микробиологии, вирусологии, эпизоотологии и биотехнологии дрожжи испытывали на хлебопекарные свойства - мальтазную и зимазную активность.

Концентрацию дрожжей определяли путем их выделения на фильтрах с пересчётом на стандартную влажность 75%.

Значимость полученных эффектов изменения качества получаемых дрожжей определялась статистическим анализом по правилу трёх сигма. Результат засчитывался, если изменение превышало тройное значение среднеквадратической экспериментальной ошибки определения соответствующего показателя в трёх параллельных опытах.

Полученные результаты исследования стимулирующего действия добавок на процесс выращивания и хлебопекарные свойства дрожжей показаны в таблице.

Превышение контрольных показателей качества дрожжей под Концентраци я дрожжей Мальтозная активность Зимазная активность Все исследованные здесь добавки оказывают заметное влияние на жизнедеятельность и активность дрожжей. Это влияние может иметь как позитивный, так и негативный характер.

Добавки природного происхождения. Добавками-активаторами могут быть вещества, содержащие важные для живых организмов витамины-кофакторы жизненно важных ферментов и микроэлементы, а также ненасыщенные жирные кислоты и вещества, стимулирующие цикл Кребса.

Добавками первого типа практически являются все исследованные экстракты природных биологически активных систем. При этом на прирост биомассы в наибольшей степени оказали положительное влияние экстракт облепихи и молочная сыворотка, а также экстракт алоэ. Эти добавки, особенно недорогая и доступная молочная сыворотка, могут с успехом применяться в лабораторных исследованиях, а сыворотка - и в производстве, в качестве добавки к мелассе.

Ферментативная активность дрожжей усиливается под влиянием добавки микроводоросли Спирулина Платенсис, которая характеризуется высоким содержанием витаминов и ненасыщенных жирных кислот.

Избирательное действие оказывает экстракт алоэ, который улучшает только мальтазную активность.

Избирательный характер позитивного влияния яблочного сока проявляется в существенной зависимости этого влияния от концентрации: только в умеренных концентрациях эта добавка может иметь положительное значение.

Добавками второго типа являются экстракт алоэ и яблочный сок (особенно при высокой концентрации), которые избирательно замедляют зимазную активность дрожжей. Яблочная кислота тормозит цикл Кребса и сильно понижает рН среды. Тем Том 3. Актуальные вопросы микробиологии, вирусологии, эпизоотологии и биотехнологии не менее добавки яблочной кислоты и экстракта алоэ несколько улучшают при рост биомассы и в умеренных концентрациях могут использоваться в лабораторных исследованиях.

Добавка янтарной кислоты при любых концентрациях оказывает позитивное влияния, как на прирост биомассы (80%), так и на ферментативную активность мальтазную (с эффектом 31,5 - 36,9 %) и зимазную (эффект 3-8,2 %). Это вещество стимулирует дыхание, так как включено в цикл Кребса. Недорогая и доступная добавка янтарной кислоты может применяться в производственных условиях.

Таким образом, из исследованных добавок наиболее эффективной и экономичной является янтарная кислота.

Использование янтарной кислоты позволяет увеличить выход продукции и улучшить качество дрожжей без капитальных вложений и дополнительного оборудования. Добавка может быть рекомендована для производственных испытаний.

1. Фараджева Е.Д., Болотов Н.А. Производство хлебопекарных дрожжей. СПб: «Професеия», 2002. - 167 с.

УДК 619:

РОСТОСТИМУЛИРУЮЩЕЕ ДЕЙСТВИЕ ДЕЛЬТА-ЭНДОТОКСИНА BACILLUS

THURINGIENSIS НА CAPSICUM ANNUUM

GROWTHSTIMULATIVE EFFECT OF DELTA-ENDOTOXIN BACILLUS

THURINGIENSIS ON CAPSICUM ANNUUM

Introduction of intensive technologies of cultivation of agricultural crops has led to significant environmental problems. First of all we are talking about the majority of pesticides and growth stimulants used in the present, and having a nonbiological origin.

Application of biologics can substantially reduce the burden on agrocenosis,arisingfrom the use of chemical pesticides and growth stimulants. One of the solution existing problematic situation is the introduction of a biological product based on the delta-endotoxin produced by Bacillus thuringiensis.

Внедрение интенсивных технологий возделывания сельскохозяйственных культур привело к существенным экологическим проблемам. В первую очередь, речь идёт о большинстве пестицидов и стимуляторов роста, применяемых в настоящее время, и имеющих небиологическое происхождение. Применение биопрепаратов позволяет существенно уменьшить нагрузку на агроценозы, возникающую в результате использования химических пестицидов и стимуляторов роста.

Возможность иммунизации растений авирулентными патогенами и их метаболитами достаточно изучена, однако такие исследования имеют в основном теоретическое значение.

Особые перспективы в качестве потенциального биологического агента имеет спорообразующие бактерии рода Bacillus.

Bacillus thuringiensis это грамположительная аэробная спорообразующая бактерия. Главным токсическим компонентом B. thuringiensis являются параспоральные кристаллы дельта-эндотоксинов. Объектом их воздействия Том 3. Актуальные вопросы микробиологии, вирусологии, эпизоотологии и биотехнологии являются сопрягающие мембраны клеток кишечного эпителия восприимчивых насекомых. Токсины обладают цитостатической активностью; они вызывают деэнергизацию клеток-мишеней вследствие разобщения окислительного фосфорилирования и дыхания.

Однако в последние годы помимо инсектицидного действия дельтаэндотоксинов установлены антибактериальные и антифунгальные свойства.

Кроме того, B.thuringiensis является естественным компонентом микрофлоры почв и, следовательно, ее применение в защитных мероприятиях существенно не нарушает видовую структуру биоценозов.

Целью данной работы является изучение возможного ростостимулирующего действия дельта-эндотоксина Bacillus thuringiensis на Capsicum annuum.

В связи с этим были поставлены следующие задачи:

1. Проанализировать действие дельта-эндотоксина B.thuringiensis на морфометрические (длина стебля и корня, длина листа по средней жилке, обхват стебля, масса растения) показатели растений;

2. Оценить действие дельта-эндотоксина B.thuringiensis на всхожесть семян, средний вес;

3. Выявить механизм ростостимулирующего действия дельта-эндотоксина Bacillus thuringiensis на растения.

Семена перца стручкового сортов «Крепыш», «Раннее чудо», «Оранжевое чудо» стерилизовали поверхностно 0,5%-ным раствором KMnO4 (15 мин) с последующим многократным промыванием стерильной дистиллированной водой.

Затем опытные образцы инкубировали в 0,3%-ном растворе дельта-эндотоксина в течение 30 минут, а контрольные – в воде и осуществляли дальнейшее проращивание в пробирках на стерильном увлажненном песке при 28-30оС в условиях 16-часового светового дня. В каждом варианте оценивали по 11 растений.

Всхожесть и энергию прорастания оценивали согласно ГОСТ 123038- «Семена сельскохозяйственных культур. Методы определения всхожести» (ГОСТ, 1986).

Морфометрические параметры оценивали стандартными методиками (Доспехов, 1973).

Наиболее оптимальную и эффективную для предпосевного замачивания концентрацию рабочего раствора дельта-эндотоксина определяли по энергии прорастания семян и лабораторной всхожести (ГОСТ, 1986). Для предварительного анализа были взяты две исходные концентрации:1,5%, 0,3%. Наилучший результат показала наименьшая концентрация 0,3% (энергия прорастания - 71%, лабораторная всхожесть – 94%), которая и послужила для дальнейших опытов (табл. 1).

Лабораторная всхожесть, % Кроме того, были проанализированы морфометрические показатели дневных проростков растений: длина стебля и корня, длина листа по средней жилке, обхват стебля, масса растения.

Том 3. Актуальные вопросы микробиологии, вирусологии, эпизоотологии и биотехнологии Влияние дельта-эндотоксина на морфологические показатели 11 Контроль 22 Дельтаэндотоксин (первичная обработка)* 33 Дельтаэндотоксин * Семена обработали дельта-эндотоксином только при посадке, в дальнейшем поливка осуществлялась дистиллированной водой В результате проделанной работы можно сделать выводы:

1. В лабораторных условиях было показано, что предварительная обработка семян перца стручкового (Capsicum annuum) раствором кристаллов дельта-эндотоксина Bacillus thuringiensis в концентрации 0,3% положительно влияет на такие морфометрические показатели как длина листа по средней жилке, обхват стебля, масса растения, длина корня, но слегка ингибирует длину стебля.

2. Предположительным механизмом ростостимуляции растений дельтаэндотоксином Bacillus thuringiensis является возникновение системного иммунитета и стимуляция синтеза фитогормонов.

УДК 619:

ВЫДЕЛЕНИЕ И ИДЕНТИФИКАЦИЯ БАКТЕРИЙ ВИДА AEROMONAS CAVIAE

ALLOCATION AND IDENTIFICATION OF BACTERIA OF KIND AEROMONAS CAVIAE

О.В. Коровёнкова, Т.И. Канаева, С.Н. Золотухин, Д.А. Васильев O.V.Korovenkova, T.I. Kanaeva, S.N. Zolotuthin, D.A.Vasilev Научно-исследовательский инновационный центр микробиологии и The research innovation centre of microbiology and biotechnology At research of tests of water from open reservoirs, waste and sewer waters, and also children's excrements presence of bacteria of kind A.caviae. As, possessing facultative pathogenic properties, bacteria of kind A.caviae (as well as other epresentatives of the given sort) can potentially become the reason of occurrence of sharp intestinal diseases at people with the weakened immunity.

Прошлое десятилетие засвидетельствовало взрыв научного интереса в отношении представителей рода Aeromonas как болезнетворных микроорганизмов животных и человек. Данный интерес, по-видимому, возникает из-за ассоциации этой грамотрицательной бациллы с желудочно-кишечной болезнью у людей, а также Том 3. Актуальные вопросы микробиологии, вирусологии, эпизоотологии и биотехнологии со сложной таксономии рода и факторов токсичности, потенциально действующих в макроорганизме. В течение прошлых лет число медицинских и научных публикаций по аэромонадам пятикратно увеличилось. Было проведено несколько международных семинаров по проблеме аэромонадной инфекции. Эти коллективные работы помогли расширить медицинский и микробиологический интерес в роду Aeromonas на глобальной основе.

Для общей информации относительно микробиологии аэромонад и вызываемой ими инфекции читателю советуем проконсультироваться с одной из нескольких недавно опубликованных обзорных статей на эту тему [5,12,13].

Aeromonas spp. - это семейство грамотрицательных палочковидных бактерий, являющихся факультативными анаэробами (т.е. могут развиваться как в безкислородной, так и в кислородной среде). По типу питания бактерии относятся к хемоорганотрофам. Некоторые виды подвижны благодаря наличию полярного жгутика. Наиболее изученными из семейства Aeromonas являются бактерии вида Aeromonas hydrophila, все другие виды бактерий, включая Aeromonas caviae, малоизученны, тем самым вызывают научный интерес.

Как и другие бактерии этого семейства (Aeromonas hydrophila, Aeromonas sobria, Aeromonas veronii и т.п. - всего на данный момент известно 25 видов), A.

caviae встречается в природных пресных водоемах, а также в придонных осадках и в почве. Известно, что бактерии Aeromonas spp. (в частности отдельные штаммы A.caviae) являются патогенами для рыб и земноводных. Однако могут встречаться также и в кишечном тракте млекопитающихся, в том числе и человека. С Aeromonas hydrophila, A. caviae и A. Sobria признаны факультативными патогенами для людей с ослабленным иммунитетом. Таким образом, бактерии A.caviae потенциально способны вызывать гастроэнтериты и у здоровых людей.

Немаловажным является поиск методов ранней и надежной идентификации возбудителя инфекции в патологическом материале, пробах из объектов окружающей среды, пищевого сырья и пищевых продуктов. До настоящего времени в России единственным нормативным документом по методам определения аэромонад в различных видах исследуемого материала являются Методические рекомендации «Методы исследований объектов окружающей среды и патологического материала на аэромонады», разработанные в Московском научноисследовательском институте гигиены им. Ф.Ф. Эрисмана в 1980 году.

Пробы воды и их разведения высевают по 0,5 мл в жидкую среду накопления, в состав которой входят: сульфат магния, К 2НР04, желатин, крахмал (среда А-1). Через 24 ч инкубирования посевов в термостате при температуре 30°С производят пересев на плотную дифференциально-элективную среду, в состав которой кроме перечисленных компонентов (среда А-1) входят: водный раствор кристаллического фиолетового и трифенилтетрахлорид (среда А-2). Посевы на плотной элективной среде инкубируют в термостате при температуре 28-30°С в течение 42-48 ч. Характеристика колоний аэромонад на плотной дифференциальноэлективной среде (среда А-2): крупные с вишневым центром и узким бесцветным ободком. Среды А-1 и А-2 являются многокомпонентными, требуют дополнительных затрат на приобретение ряда дорогих химических реактивов и ингредиентов.[1] В научно-исследовательском инновационном центре микробиологии и биотехнологии УГСХА, в том числе в лаборатории кафедры микробиологии, вирусологии, эпизоотологии и ВСЭ была разработана среда накопления (УГСХА – 1А.h.), и плотная дифференциально-диагностическая среда для выделения и идентификации аэромонад (УГСХА-2 A.h.).

Среда накопления и обогащения имеет следующий состав: вода дистиллированная – 1000 мл, дрожжевой экстракт – 4,0г, мальтоза – 3,5г, К2НРО4– 2,0г, МgSО4– 5,0г, желатин – 50,0г, конго-рот – 3,0г, кристаллический фиолетовый – Том 3. Актуальные вопросы микробиологии, вирусологии, эпизоотологии и биотехнологии 0,1г. Способ приготовления: дрожжевой экстракт вносили в холодную воду 1000 мл, после чего ее нагревали. Затем последовательно добавили калий фосфорнокислый двузамещенный и магния сульфат, мальтозу, конго-рот (в виде 0,3% водного раствора) и кристаллический фиолетовый (в виде 0,01% водного раствора).

Кипятили 2-3 минуты, при постоянном помешивании. В бульон внести желатин и оставить для набухания на 1 час, затем подогреть в водяной бане при 40 – 500С до полного расплавления желатина. После этого горячую среду фильтровали через ватно-марлевый фильтр и разлили в стерильные пробирки по 5 мл. Стерилизовать при 1100С 30 минут.[2] Питательной основой этой среды является дрожжевой экстракт и мальтоза (по 4,0 г и 3,5 г соответственно). Хорошей минеральной базой оптимального состава для бактерий является набор солей фосфата калия двузамещенного (К2НРО4) 2,0 г и семиводного сульфата магния (МgSО4) 5,0 г. Соли калия, магния и фосфора стимулируют синтез микробной клетки, а для образования бактериальных белков необходимы анионы, содержащие серу. Для уплотнения среды, а также во избежание выпадения элективного агента в осадок и равномерного распространения его во всей среде добавляется желатин (5%), кроме того желатин является растворимым белком. Бактерии Aeromonas caviae обладают протеолитической активностью и способны разжижать желатин, что можно использовать в качестве дифференциации. Красители выступают в качестве селективного агента.

После процедуры накопления и обогащения бактерии пересевают с жидких сред на плотные питательные среды, для изучения морфологических, культуральных, биохимических и антигенных свойств, по совокупности которых определяется видовая принадлежность исследуемого микроорганизма. Прототипом плотной селективной среды послужила среда накопления УГСХА-1A.h., к которой был добавлен агар-агар в количестве 15 г. на 1000 мл. дистиллированной воды.

Цвет среды красно-коричневый.[2] С помощью предложенной схемы выделения и идентификации аэромонад на базе кафедры микробиологии, вирусологии, эпизоотологии и ВСЭ Ульяновской ГСХА были проведены исследования по изучению распространения бактерий вида Аеrоmonas caviae.

Материалом для исследования послужили пробы воды из открытых водоемов Ульяновской области. При обнаружении аэромонад исследовалась водопроводная вода, а также канализационные и сточные воды на территории Ульяновска. Известно, что бактерии рода Aeromonas являются достаточно частой причиной возникновения острых кишечных заболеваний (ОКЗ), особенно у детей в возрасте до 1 года. Связи с этим, из Детской инфекционной больницы г. Ульяновска нам были предоставлены пробы фекалий, взятых у детей с диарейным синдромом.

Из открытых водоемов было взято 69 проб воды, из водопроводной воды – 6 проб, из сточных и канализационных – 7 проб. Кроме того, проводилось исследование 13 проб детских фекалий на контаминацию бактерий вида A.caviae.

Пробы воды по 1 мл и пробы детских фекалий по 1 г засевали в жидкую накопительную среду УГСХА-1A.h., культивировали в течение 24 часов при температуре 37C. По истечении времени наблюдали помутнение среды и разжижение желатина.

Затем со среды накопления пересевали культуру на плотную селективную среду УГСХА-2A.h., культивировали в термостате при 37C в течение суток. На плотной селективной среде отмечается рост округлых, выпуклых, светло- бежевых, блестящих колоний до 1 мм в диаметре.

Том 3. Актуальные вопросы микробиологии, вирусологии, эпизоотологии и биотехнологии метиловым красным Образование индола Тест ХьюЛейвсона:

Аргининдегидрол аза Использование Симмонса) +-положительная реакция - -отрицательная реакция F-расщепление углеводов ферментацией В - возможно положительная реакция (31) - % положительно реагирующих штаммов бактерий Том 3. Актуальные вопросы микробиологии, вирусологии, эпизоотологии и биотехнологии Выделенные бактерии идентифицировали с помощью окраски по Грамму с последующей микроскопии, тестов на оксидазу, каталазу, образования индола и сероводорода, ферментации углеводов, OF-тест, пробы с метиловым синим, реакции Фогес-Проскауэ, использования цитрата на среде Симмонса, наличия аргининдегидролазы, лизиндекарбоксилазы и орнитиндекарбоксилазы.

Внутривидовая идентификация интересующей нас бактерии подтвердилось путем проведения ряд биохимических тестов.

Таким образом, можно сделать вывод, что при исследовании проб воды из открытых водоемов, сточных и канализационных вод, а также детских фекалий наблюдается контаминация бактерий рода Aeromonas.

Результаты исследования проб воды открытых водоёмов, водопроводной воды, сточных и канализационных вод, а также детских фекалий на контаминацию бактерий вида Aeromonas 1 Вода из открытых водоёмов 2 Сточные и канализационные воды «-» отсутствовала контаминация Как видно из таблицы 2, из открытых водоемов Ульяновской области было выделено 2 штамма бактерий вида A.caviae, 5 штаммов бактерий вида A.hydrophila, штамм бактерий вида A.veronii; из канализационных и сточных вод - 1 штамм бактерий вида A.caviae; из детских фекалий-1 штамм бактерий вида A.caviae. Из водопроводной воды выделить изучаемые бактерии не удалось.

Следовательно, медицинским работникам необходимо обратить свое внимание на контаминацию бактерий вида A.caviae в патологическом материале, пробах из объектов окружающей среды, пищевого сырья и пищевых продуктов. Поскольку, обладая факультативными патогенными свойствами, бактерии вида A.caviae (как и другие представители данного рода) потенциально могут стать причиной возникновения острых кишечных заболеваний у людей с ослабленным иммунитетом.

1. Т.И. Канаева, Д.А. Васильев, М.А.Столярова, И.Р.Насибуллин. Выделение и идентификация бактерий вида Aeromonas hydrophila. Материалы Международной научно – практической конференции «Биотехнология, вода и пищевые продукты». М.,2008.-с.124-125.

2. Т.И.Канаева, Д.В.Васильев. Разработка селективных сред и бактериологической схемы диагностики бактерий Aeromonas hydrophila, вызывающих аэромоноз рыб. Современное состояние и перспективы исследований по инфекционной и протозойной патологии животных, рыб и пчел. //Материалы международной научно-практической конференции. М., 2008.- с.378-382.

3. Коровёнкова О.В. Анализ распространения бактерий вида Aeromonas caviae. / Васильев Д.А., Канаева Т.И., Коровёнкова О.В. //Материалы Международной научно-практической конференции «Актуальные вопросы аграрной науки и Том 3. Актуальные вопросы микробиологии, вирусологии, эпизоотологии и биотехнологии образования», посвященной 65-летию Ульяновской ГСХА. Ульяновск, ГСХА, 2009,т.4, 134-139с.

4. Abrutyn, E. 1988. Hospital-associated infection from leeches.Ann. Intern. Med.

109:356-358.

5. Altwegg, M. 1989. Aeromonas as a human pathogen. Crit. Rev.Microbiol. 16:253Altwegg, M., A. G. Steigerwalt, R. Altwegg-Bissig, J. Luthy-Hottenstein, and D. J.

Brenner. 1990. Biochemical identification of Aeromonas genospecies isolated from humans. J. Clin.Microbiol. 28:258-264.

7. Brook, I., J. Rogers, D. M. Rollins, J. C. Coolbaugh, and R. I.Walker. 1985.

Pathogenicity of Aeromonas. J. Infect. 10:32-37.

8. Hickman-Brenner, F. W., G. R. Fanning, M. J. Arduino, D. J., Brenner, and J. J.

Farmer III. 1988. Aeromonas schubertii, a new mannitol-negative species found in human clinical specimens. J. Clin. Microbiol. 26:1561-1564.

9. Hickman-Brenner, F. W., K. L. MacDonald, A. G. Steigerwalt, G. R. Fanning, D. J.

Brenner, and J. J. Farmer III. 1987. Aeromonas veronii, a new ornithine decarboxylase-positve species that may cause diarrhea. J. Clin. Microbiol. 25:900Honma, Y., and N. Nakasone. 1990. Pili of Aeromonas hydrophila: purification, characterization, and biological role. Microbiol.Immunol. 34:83-98.

11. Janda, J. M., and R. Brenden. 1987. Importance of Aeromonas sobria in Aeromonas bacteremia. J. Infect. Dis. 155:589-591.

12. Janda, J. M., and P. S. Duffey. 1988. Mesophilic aeromonads in human disease:

current taxonomy, laboratory identification, and infectious disease spectrum. Rev.

Infect. Dis. 10:980-997.

13. Khardori, J., and V. Fainstein. 1988. Aeromonas and Plesiomonas as etiological agents. Annu. Rev. Microbiol. 42:395- 419.

УДК 619:

ИЗУЧЕНИЕ ВЛИЯНИЯ «ТЕОТРОПИНА» НА БАКТЕРИИ BACILLUS MESENTERICUS

STUDYING OF INFLUENCE «TEOTROPINA» ON A BACTERIUM BACILLUS

MESENTERICUS

Н.Х. Курьянова, Н.А. Феоктистова, М.А. Юдина, Д.А. Васильев N.H. Kurjanova, N.A. Feoktistova, M.A. Udina, D.A. Vasiliev Научно-исследовательский инновационный центр микробиологии и The research innovation centre of microbiology and biotechnology In article results of researches on influence of a disinfectant «Teotropina» on a bacterium Bacillus mesentericus are described.

Чрезвычайно актуальна в настоящий момент проблема контаминации пищевого сырья и продуктов питания патогенными бациллами, в том числе и Bacillus mesentericus. На этапах технологического процесса производства продуктов питания происходит обсеменение сырья, полуфабрикатов и готовых продовольственных товаров бациллами из воздуха цеха, с инвентаря, рук работников. Бациллы – это почвенные микроорганизмы, имеющие плотную оболочку, не разрушаемую ни воздействием высоких и низких температур, ни применением в качестве консервантов для сохранения продуктов питания, высоких концентраций соли и Том 3. Актуальные вопросы микробиологии, вирусологии, эпизоотологии и биотехнологии сахара. Бациллы, в том числе и Bacillus mesentericus, при обсеменении сырья и продуктов питания незначительно изменяют их органолептических свойств, поэтому определить их наличие не всегда возможно до тех пор, пока не появятся симптомы интоксикации. Пищевые токсикозы, вызванные бактериями вида Bacillus mesentericus, характеризуются острым течением болезни и могут вызвать летальный исход.

Обсеменение пищевых продуктов часто происходит из-за неэффективности применяемых для обработки оборудования и инвентаря дезинфектантов.

Ранее для дезинфекции использовались препараты, содержащие хлор и его производные, которые в настоящее время запрещены из-за своего токсического действия на организм человека и животных. В настоящее время чрезвычайно актуальна проблема поиска дезинфицирующих средств, обладающих рядом свойств, а именно широким спектром ингибирующего воздействия на бактерии и вирусы, малой токсичностью и экономической эффективностью.

«Теотропин» - дезинфектант нового поколения, обладающий сильной бактерицидной и вирулицидной активностью при сравнительно низких концентрациях и низкой токсичностью (например, вызывает отравления при однократном применении, при парентеральном введении составляет 375 мг/кг живой массы (примерно 0,6 литра 5 %-ого раствора для взрослого человека, 1,8 л для взрослой свиньи, 3,0 л для коровы).

Цель данной работы – изучение воздействия дезинфектанта нового поколения «Теотропина» на часто выделяемые из пищевых продуктов бактерии вида Bacillus mesentericus.

Для исследования мы использовали 2 штамма бактерий вида Bacillus mesentericus, полученные из музея кафедры микробиологии, вирусологии, эпизоотологии и ВСЭ ФГОУ ВПО «Ульяновская ГСХА».

Биомассу бациллярных бактериальных культур нарабатывали на жидких питательных средах: мясопептонном бульоне с 1% глюкозы, мясопептонном бульоне с 0,5 % сыворотки крупного рогатого скота. В дальнейшем биомассу трехкратно центрифугировали, освобождая от питательной среды, и концентрировали до 1010м.к./мл. В полученную бактериальную суспензию добавляли раствор «Теотропина» с учетом его конечного содержания 10 мг\мл. Данная концентрация была выбрана эмпирическим путем.

Ранее были проведены соответствующие исследования по изучению концентраций «Теотропина» 1; 2,5; 5; 7,5 мг/мл по вышеуказанной методике.

Результаты исследований показали, что препарат в вышеобозначенных концентрациях оказывал явно выраженное бактерицидное действие на бактерии вида Bacillus mesentericus Бактериостатическое действие «Теотропина» на бактерии вида Bacillus mesentericus проверяли методом контрольного высева бактериальных культур, взаимодействующих с препаратом, в различные промежутки времени (от 1 до часов с интервалом в 30 минут) без освобождения их от буферного раствора, содержащего препарат.

Бактерицидную активность «Теотропина» также определяли методом контрольного высева бактериальной суспензии, но после освобождения ее от «Теотропина» дифференциальным центрифугированием получали осадок бактерий.

Надосадок, с содержащимся в нем «Теотропином», удаляли, а осадок ресуспендировали в чистом буфере и, после часовой экспозиции, высевали на твердые питательные среды. Отсутствие бактериального роста в течение 5 суток (срок наблюдения) означало, что данная доза препарата при используемой экспозиции обладает бактериостатическим или бактерицидным действием.

В результате проведенных исследований было установлено следующее:

Том 3. Актуальные вопросы микробиологии, вирусологии, эпизоотологии и биотехнологии - «Теотропин» в дозе свыше 5 мг\мл при концентрации бактерий 1010м.к./мл обладает бактериостатическим действием после 5 часовой экспозиции по отношению к грамоложительным бактериям Bacillus mesentericus;

- «Теотропин» в концентрации 10 мг\мл после 18 часовой экспозиции с изучаемыми бактериальными культурами (в концентрации 1010м.к./мл) проявлял ярко выраженный бактерицидный эффект.

Бактерицидные свойства «Теотропина» по отношению к бактериям вида Bacillus mesentericus могут быть с успехом использованы в биотехнологии в качестве инактиватора для получения биопрепаратов.

Перспективы развития дезинфектологической науки и практики не ограничиваются задачей разработки «идеальных» дезинфекционных средств, но требуют совершенствования технологий обработки объектов, инструментов и др. и даже оптимизации всей системы дезинфекционно-стерилизационного обеспечения профилактических мероприятий.

Представляется актуальным сегодня и важным в перспективе внедрение дезинфектологических технологий, отвечающих следующим современным требованиям:

- обеспечение адекватной эффективности (степени деконтаминации объекта) от дезинфекции низкого уровня, когда этого достаточно, до (при необходимости) стерилизаций и даже «деприонизации»;

- обеспечение безопасности проводимых дезинфекционных мероприятий для пациентов, персонала и окружающей среды;

- обеспечение совместимости с материалами приборов, инструментов, и иных обрабатываемых объектов;

- пригодность для использования в учреждениях разного профиля;

- простота использования;

- экономическая приемлемость.

По нашему мнению, разработка технологических схем использования «Теотропина» в качестве дезинфектанта для пищевых производств, где одним их наиболее часто встречающихся контаминантов являются бактерии рода Bacillus, была бы чрезвычайно своевременна и эффективна.

Том 3. Актуальные вопросы микробиологии, вирусологии, эпизоотологии и биотехнологии УДК 616:

СХЕМА ОБРАБОТКИ БИОЛОГИЧЕСКИМ СТИМУЛЯТОРОМ РОСТА «УГСХА-08»

СЕЛЬСКОХОЗЯСТВЕННЫХ КУЛЬТУР ПШЕНИЦЫ В ПОЧВЕННОКЛИМАТИЧЕСКИХ УСЛОВИЯХ УЛЬЯНОВСКОЙ ОБЛАСТИ

THE SCHEME OF THE PROCESSING BIOLOGICAL

FACILITATOR OF THE GROWING "UGSHA-08" AGRICULTURAL CULTURES OF THE

WHEAT IN SOIL-CLIMATIC CONDITION ULIYANOVSKOY AREA

Научно-исследовательский инновационный центр микробиологии и The research innovation centre of microbiology and biotechnology In recently in world practical person is traced trend to reduction of the doses of the applicable mineral fertilizers and increases the role biological preparation and their use in agricultures which support the natural fertility of ground and raise the biological variety useful soil microbiological flora.

Accordingly, appears need of the study to efficiency of the action proposed preparation on biochemical processes, quality and harvest to vegetable product with provision for particularities of each concrete region and his soil-climatic conditions and varieties sort. Only such approach can give the real fruits and will allow to develop the optimum dosages and condition of the using the preparation.

In this article is demonstrated scheme of the processing the wheat in condition Uliyanovskoy area.

Известно, что природные и синтетические регуляторы роста и развития растений являются мощным средством управления онтогенезом растений. Поэтому в свете развития органического земледелия они находят широкое применение в биотехнологии сельскохозяйственных культур и в практическом растениеводстве.

Предвестники таких препаратов с росторегулирующей и антистрессовой активностью были экстрагированы из культур соответствующих грибов еще 40 лет назад (Гельцер 1981;1990). В последнее время, в мировой практике отслеживается тенденция снижение доз применяемых минеральных удобрений и возрастает роль агротехническими приемами, направленными на поддержание естественного плодородия почв, включая научно обоснованные севообороты и мероприятия, направленные на повышение биоразнообразия полезной почвенной микрофлоры.

На фоне развития органического земледелия популярность биопрепаратов на современном рынке растет и пришло время ставить вопрос о включении их в регламент средств системы защиты растений совместно с ХСЭР как один из важнейших способов биологической коррекции формирования урожая основных сельскохозяйственных культур. Огромное экономическое значение имеет совместное применение биопрепаратов с синтетическими пестицидами (Гилязетдинов Ш.Я.., и др 2008).

Следует упомянуть книгу академика РАСХН И.А. Тихоновича и соавторов (2005), а так же книги В.И. Лазарева, А.Ю. и др. (2003), О.Н. Логинова (2005), А.И.

Меленьтьева (2007), А.А. Завалина (2005) и сборники трудов В.В. Игнатова (2005) и др. В этих обширных научных сводках хорошо обоснованы проблемы взаимодействия растений с почвой, а также с эндофитными микроорганизмами и грибами в формировании урожая ценных сельскохозяйственных культур.

Том 3. Актуальные вопросы микробиологии, вирусологии, эпизоотологии и биотехнологии Большое значение имеет учет особенностей реальных агротехнологий и сортов определенной климатической зоны.

Таким образом, возникает необходимость изучения эффективности действия предлагаемых препаратов на физиолого-биохимические процессы, качество и урожай растительной продукции с учетом особенностей каждого конкретного региона и его почвенно-климатических условий и разнообразия сортов. Только такой подход может дать реальные плоды и позволит разработать оптимальные дозировки и условия применения препарата.

В Ульяновской области исследуются перспективы использования биологического стимулятора роста и развития растений «УГСХА-08», состоящего из продуктов жизнедеятельности эндофитных грибов и микроорганизмов.

В работе изучалось влияние препарата «УГСХА-08» на урожай сельскохозяйственных культур семейства злаковые на примере яровой пшеницы.

Исследования проводились на опытном поле УГСХА в 2010г. Почва – чернозем среднегумусовый, pH-6,9. В связи с этим была разработана соответствующая схема опыта. Агротехника возделывания яровой пшеницы – общепринятые для зоны, посев вариантов – на делянках 15 м2, повторность – 4-кратная. Схема опыта предусматривала предпосевную обработку семян и растений в процессе вегетации в 7 вариантах, из расчета 1мл препарата на 1 га площади:

1) Контроль (без обработки семян и посевов);

2) Обр-ка семян УГСХА-08 (1 мл);

3) Обр-ка семян УГСХА-08 (2 мл);

4) Обр-ка семян УГСХА-08 (3 мл);

5) Обр-ка семян УГСХА-08 (1 мл) +Гумат + CuSO4;

6) Обр-ка семян УГСХА-08 (2 мл) +Гумат + CuSO4;

7) Обр-ка семян УГСХА-08 (3 мл) +Гумат + CuSO4;

При этом раствор для предпосевной обработки семян готовился в соотношении 1:10000,а для обработки растений в процессе вегетации в соотношении 1:300000. Семена замачивают в соответствующих растворах биопрепарата «УГСХА-08» по приведенной выше схеме, соотношение объема раствора к количеству семян 1:1 (1л раствора на 1 кг семян) в течение 5-30 минут.

После замачивания семена подсушивают или высевают во влажном состоянии.

Растения обрабатываются опрыскивателем в приведенной выше концентрации.

Растения опрыскивают перед и во время колошения для увеличения клейковины зерна.

Данная методика, на наш взгляд, должна оптимально подойти к почвенноклиматическим условиям Ульяновской области.

1. Гельцер Ф.Ю. Микробиологическая теория иммунитета//

Защита растений 2. Гельцер Ф.Ю. Симбиоз с микроорганизмами – основа жизни растений.М., 3. Гилязетдинов Ш.Я. Эффективность антистрессовых препаратов и биофунгицидов в системе защиты сельскохозяйственных культур от неблагоприятных абиотических и биотических факторов / Ш.Я. Гилязетдинов.

(отв. ред), А.Х.Нугуманов, Л.И. Пусенкова Уфа: Гилем 2008. 372 с.

4. Завалин А.А. Биопрепараты, удобрения и урожай.М.: Изд-во ВНИИА, 2005.

5. Лазарев В.И., Айдиев А.Ю., Казначеев М.Н. и др. Биопрепараты на посевах сельскохозяйственных культур. Курск, 2003. 127 с.

Том 3. Актуальные вопросы микробиологии, вирусологии, эпизоотологии и биотехнологии УДК 616:

РАЗРАБОТКА МЕТОДИКИ СЕРОЛОГИЧЕСКОЙ ИДЕНТИФИКАЦИИ

BORDETELLA BRONCHISEPTICA C ПОМОЩЬЮ ИММУНОЭЛЕКТРОФОРЕЗА

DEVELOPMENT OF A TECHNIQUE OF SEROLOGICAL IDENTIFICATION OF

BORDETELLA BRONCHISEPTICA BY IMMUNOELECTROPHORESIS

А.В. Мастиленко, Д.Г. Сверкалова, Е.Г. Семанин, Ю.Б. Васильева A.V. Mastilenko, D.G. Sverkalova, E.G. Semanin, Yu.B. Vasileva Научно-исследовательский инновационный центр микробиологии и The research innovation centre of microbiology and biotechnology Bordetellosis fairly widespread disease in animals and humans. Identification of Bordetella bronchiseptica by using microbiological methods is quite complicated. One of the leading methods of accurate identification of the antigenic composition of the microbial mixture is immunoelectrophoresis.

Бордетеллез довольно широко распространенное заболевание животных и человека. Достаточно сказать, что по данным ВОЗ, ежегодно заболевают коклюшем до 60 млн. человек. У животных проблему заболеваний, вызванных Bordetella bronchiseptica, стали рассматривать уже в начале XX века в странах Европы и США.[3]. Однако на территории Российской Федерации до настоящего времени серьезно этим вопросом не занимались.

Идентификация Bordetella bronchiseptica с помощью микробиологических методов достаточно сложна, так как микроорганизм является слабым ферментером.

В связи с этим встает вопрос о разработке скрининговых методов обнаружения возбудителя в биоматериале.

Одним из ведущих методов точной идентификации антигенного состава микробной смеси является иммуноэлектрофорез.[2].

Иммуноэлектрофоретический анализ представляет собой сочетание электрофореза в агаровом геле с иммунодиффузией.[1].

Для апробации предложенной методики были использованы штаммы Bordetella bronchiseptica, Bordetella parapertussis а также других грамотрицательных и грамположительных бактерий из коллекции музея кафедры МВЭиВСЭ ФГОУ ВПО «Ульяновская ГСХА».

Для получения бактериальной массы были использованы искусственные питательные среды – мясо-пептонный и казеиново-угольный агары. Также было использовано следующее оборудование: термостат с постоянной температурой 37°С, центрифуга (до 3000 об/мин), набор лабораторной посуды.

Для получения антигенной взвеси бактериальных клеток был применен метод ультразвуковой дезинтеграции на аппарате Sonipep 150 MSE (Великобритания) с последующим центрифугированием исходной смеси.

Электрофорез проводили в камере SE-1 («Helicon») при использовании постоянного источника тока «Эльф-4» (ООО «ДНК-Технология», Москва). Был использован трис-боратный буфер с рН-8,3. Режим электрофореза: 200В, 100mA, 5,0Вт в течение 30 минут. В качестве поддерживающей среды был использован 2% агарозный гель.

Для проведения иммунодиффузии была использована антисыворотка к Bordetella bronchiseptica, полученная при проведении гипериммунизации кроликов.

Иммунодиффузия продолжалась 24-48 часов при комнатной температуре во влажной камере.

Том 3. Актуальные вопросы микробиологии, вирусологии, эпизоотологии и биотехнологии Вначале нами был проведен собственно электрофорез антигенов в агарозном геле в течение 30 минут. Толщина геля составляла 3-4 мм. Затем в канавку, параллельную миграции антигенов, была помещена гипериммунная сыворотка. Для равномерной диффузии пластина с гелем находилась во влажной камере в течение 24-48 часов. После этого линии преципитации наблюдали в боковом освещении на темном фоне (рис.1,2,3). Гели документировали и проводили анализ.

антисывортка к Bordetella bronchiseptica Рис.1. Иммуноэлектрофореграмма антигенов Bordetella bronchiseptica (лунка 1) и Bordetella parapertussis (лунка 2), полученная с помощью кроличьей антисыворотки к Bordetella bronchiseptica.

антисывортка к Bordetella bronchiseptica Рис.2 Иммуноэлектрофореграмма антигенов Bordetella bronchiseptica штаммов №214 (лунка 1) и №22067 (лунка 2), полученная с помощью кроличьей антисыворотки к Bordetella bronchiseptica.

антисывортка к Bordetella bronchiseptica Рис.3 Иммуноэлектрофореграмма антигенов Bordetella bronchiseptica штаммов №22067 (лунка 1) и штамма №10608 (лунка 2), полученная с помощью кроличьей антисыворотки к Bordetella bronchiseptica.

Том 3. Актуальные вопросы микробиологии, вирусологии, эпизоотологии и биотехнологии При анализе данных иммноэлектрофореза нам удалось идентифицировать до 6 антигенов Bordetella bronchiseptica, преципитированных гипериммунной кроличьей сывороткой. Также данная сыворотка частично преципитирует антигены Bordetella parapertussis (рис.1), что связано с наличием общих антигенных детерминант. По всем имеющимся в нашем распоряжении штаммам Bordetella bronchiseptica наблюдается идентичность количества и расположения преципитатов.

В данной работе был применен метод иммуноэлектрофореза с использованием достаточно доступного трис-боратоного буфера с рН-8,3.

В результате данного эксперимента удалось идентифицировать до антигенов Bordetella bronchiseptica, полученных с помощью ультразвуковой дезинтеграции бактериальной массы.

По всем штаммам Bordetella bronchiseptica на иммуноэлектрофореграммах наблюдается идентичность количества и расположения преципитатов.

Таким образом, при наличии соответствующей преципитирующей антисыворотки данный метод позволяет исследовать любую антигенную смесь на идентичность с Bordetella bronchiseptica, а при наличии антигенной взвеси чистой культуры Bordetella bronchiseptica - идентифицировать любую сыворотку на наличие антител к этим антигенам.

1. Фримель, Х. и др. Иммунологиеские методы. М.: Мир, 1979.

2. Чарный, В.И. Установление видовой специфичности белков крови. М:

Медицина, 1976.

3. Ross, R., J.Munoz and C.Cameron. Histamin-sensitizing Factor, Mouse-protective Antigens, and Other Antigens of Some Members of the Genus Bordetella. Journal of Bacteriology, July 1969, No.1, Volume 99, p.57-44.

Том 3. Актуальные вопросы микробиологии, вирусологии, эпизоотологии и биотехнологии УДК 619:578.832.

ОТРАБОТКА ПАРАМЕТРОВ КУЛЬТИВИРОВАНИЯ ВИРУСА ГРИППА ПТИЦ Н5N

НА КУРИНЫХ ЭМБРИОНАХ

WORKING OFF PARAMETERS OF POULTRY FLUE Н5N2 VIRUS CULTIVATION ON

POULTRY EMBRYOS

РУП «Институт экспериментальной ветеринарии им. С.Н. Вышелесского»

RUE “Institute of experimental veterinary named after S.N. Vyshelessky” As a result of research conducted it was determined that low concentration and GAA of poultry flue Н5N2 was noticed at infection of 9-day KE in chorion-allantoic membrane in the amount of 100 lg EID50/0,2ml with further cultivation within 72 hours.

Keeping these parameters we obtain maximum possible volume of virus containing material with IT 7,0-7,5 lg EID50/ml and GAA 6-8 logg.

Среди вирусов, способных вызвать эпизоотические ситуации, борьба с которыми на этапе их возникновения трудна или вообще невозможна, особенно опасны вирусы гриппа. В последнее десятилетие во многих странах мира зарегистрированы эпизоотические вспышки данного заболевания среди птиц. Для того чтобы защитить поголовье в промышленном птицеводстве существует система мер по соблюдению биологической безопасности. Кроме этого при угрозе возникновения болезни важным средством борьбы является вакцинопрофилактика [1-9].

Для получения высокоэффективного препарата необходим подтип вируса, гомологичный циркулирующему подтипу по гемагглютинину, обладающий способностью к накоплению в высоких титрах в биологическом материале, а также высокой гемагглютинирующей активностью (ГАА). Перед нами была поставлена задача установить оптимальные параметры культивирования вируса гриппа птиц (ВГП) Н5N2 с инфекционным титром (ИТ) 7,0 lg ЭИД50/мл и ГАА 8 log2 в КЭ для его накопления и последующего изготовления на его основе инактивированной вакцины.

Большинство исследователей для культивирования вируса гриппа птиц используют 9-11 суточные куриные эмбрионы (КЭ). Согласно литературным данным, максимальное накопление вируса в КЭ происходит в течение 48–96 часов в аллантоисной и амниотической жидкости при заражении дозой 100-1000 lg ЭИД50/0,2мл. Поэтому при проведении исследования учитывали следующие показатели: возраст КЭ – 9, 10 и 11 суток; доза заражения КЭ – 100 lg ЭИД50/0,2мл и 1000 lg ЭИД50/0,2мл; время культивирования – 48, 72, 96 часов.

КЭ 9-, 10- и 11-ти суточного возраста заражали ВГП Н5N2. В хорионаллантоисную оболочку инокулировали по 0,2 мл вируссодержащего материала в дозах 100 lg ЭИД50/0,2мл и 1000 lg ЭИД50/0,2мл. Использовали по 12 КЭ каждого возраста для заражения вышеуказанными дозами. Культивировали в условиях инкубатора при температуре +37,0°С и относительной влажности 60%, проводя овоскопирование 1 раз в сутки. Наибольшая концентрация вируса и его ГАА наблюдается в период гибели эмбрионов. Поэтому при овоскопировании отбирали умерших КЭ и помещали их в холод. Гибель в течение первых 24 часов считали неспецифической. В последующем через 48, 72 и 96 часов из инкубатора отбирали по 4 КЭ всех возрастов, зараженных 100 lg ЭИД50/0,2мл и 1000 lg ЭИД50/0,2мл, охлаждали при температуре +6°С в течение 12-24 часов и вскрывали.

Экстраэмбриональную жидкость от каждого КЭ проверяли в капельной реакции гемагглютинации (РГА) на стекле с 1%-й взвесью эритроцитов петуха на наличие Том 3. Актуальные вопросы микробиологии, вирусологии, эпизоотологии и биотехнологии гемагглютинирующего вируса. Если РГА была положительной, то жидкости от каждой группы эмбрионов стерильно отбирали в отдельные флаконы. В полученном таким образом вируссодержащем материале определяли гемагглютинирующую и инфекционную активность. ГАА вируса проверяли постановкой РГА в иммунологических планшетах с U-образным дном. Для исследования ИТ заражали 9-суточных КЭ десятикратными разведениями вируса. На каждое разведение использовали по 4 КЭ, вводя по 0,2 мл вируссодержащего материала в хорионаллантоисную оболочку. Инкубировали 96 часов при температуре +37,0°С и влажности 60% в условиях инкубатора. Гибель КЭ в течение первых 24 часов считали неспецифической и при определении ИТ вируса не учитывали. По истечении срока инкубации эмбрионы охлаждали и вскрывали. Определяли наличие вируса в экстраэмбриональной жидкости с помощью капельной РГА на стекле с 1%й взвесью эритроцитов петуха. ЭИД50 рассчитывали по методу Кербера в модификации Ашмарина.

В результате проведенного исследования было установлено, что наибольшая концентрация и ГАА вируса гриппа птиц Н5N2 наблюдается при заражении им 9суточных КЭ в хорион-аллантоисную оболочку в дозе 100 lg ЭИД50/0,2мл, при дальнейшем культивировании в течение 72 часов. Соблюдая данные параметры, мы получаем максимально возможный объем вируссодержащего материала с ИТ 7,0-7, lg ЭИД50/мл и ГАА 6-8 log2.

1. Грипп и другие вирусные инфекции птиц / В. А. Бакулин [и др.] ; Рос. акад. с.-х.

наук, Всерос. науч.-исслед. ветеринар. ин-т птицеводства, Рос. акад. мед.

наук, ГУ Науч.-исслед. ин-т гриппа. - Санкт-Петербург, 2005. - 74 с. : ил.

2. Макаров, В. В. Высокопатогенный грипп птиц / В. В. Макаров // Ветеринария в птицеводстве. – 2004. - № 1. – С. 47-48.

3. Испытание вакцины против высокопатогенного гриппа птиц в эксперименте / Э. Д. Джавадов [и др.] // Птица и птицепродукты. – 2006. - N 3. – С. 40- 4. Domanska-Blicharz, K. Molecular methods for the detection of avian influenza type a viruses / K. Domanska-Blicharz, K. Smietanka, Z. Minta // Bull. Veter. Inst. in Pulawy. – 2006. – Vol. 50, № 3. – P. 287-291.

5. Brugh, M. Pathogenicity of three avian influenza viruses for Leghorn hens of different ages / М. Brugh // Avian Dis. – 1996. – Vol. 40, № 3. – P. 725-728.

6. Immunity to Mexican H5N2 avian influenza viruses induced by a fowl-pox-H recombinant / R. G. Webster [et al.] // Avian Dis. – 1996. – Vol. 40, N 2. – P. 461Лагуткин, Н. Грипп птиц / Н. Лагуткин // Птицеводство. – 1997. - № 1. – С. 22Swayne, D. E. Pathobiology of H5N2 Mexican avian influenza virus infections of chickens / D. E. Swayne // Veter. Pathol. – 1997. – Vol. 34, N 6. – P. 557-567.

9. Experimental assessment of the pathogenicity of two avian influenza A H5 viruses in ostrich chicks (Struthio camelus) and chickens / R. J. Manvell [et al.] // Avian Pathol. – 1998. – Vol. 27, N 4. – P. 400-404.

Том 3. Актуальные вопросы микробиологии, вирусологии, эпизоотологии и биотехнологии УДК 619:578.832.

БАКТЕРИОФАГИ AEROMONAS HYDROPHILA

BACTERIOPHAGES OF AEROMONAS HYDROPHILA

Научно-исследовательский инновационный центр микробиологии и The research innovation centre of microbiology and biotechnology Bacteria of sort Aeromonas are activators of various infectious diseases. The offered method фагодиагностики is simple and effective for identification and indication of the given bacteria.

Интерес к бактериям рода Aeromonas возрос в связи с этиологическим значением этих микроорганизмов в инфекционных заболеваниях человека и животных. Бактерии рода Aeromonas являются возбудителями диарейных заболеваний и представляют серьезную проблему для многих стран Азии, Европы и Америки, в которых аэромонадная инфекция составляет от 1 до 10% острых кишечных заболеваний у взрослых, и до 50% у детей (3).Обладая психрофильными свойствами, бактерии Aeromonas способны сохраняться, размножаться и вызывать порчу замороженных продуктов. Род Aeromonas широко распространен в окружающей среде: их выделяют из речной и морской воды, сточных вод, почвы, от гидробионтов, растений и теплокровных животных. Бактерии Aeromonas хорошо растут при 20-30 С, pH 7,0 на простых питательных средах. Хорошо переносят низкие температуры (5). Целенаправленного поиска Aeromonas в объектах ветеринарно-санитарного надзора в нашей стране не проводиться, так как наличие этих микроорганизмов не регламентируется действующими нормативными документами. Существующие методические разработки НИИ гигиены имени Ф.Ф.

Эрисмана мало известны и являются дорогостоящими, трудоемкими и длительными (3). Предлагаемый нами метод фагодиагностики является менее трудоемким и более доступным для лаборатории любого уровня. В нашей стране отсутствуют стандартные наборы специфических бактериофагов Aeromonas (1), поэтому целью наших исследований является выделение активных фагоизолятов, лизирующих бактерии Aeromonas hydrophila, изучение их биологических свойств и создание на их основе диагностического биопрепарата, для идентификации и индикации с помощью РНФ (4) бактерий рода Aeromonas в объектах ветеринарно-санитарного надзора.

Материалы: в работе использованы 8 штаммов Aeromonas hydrophila. В качестве питательных сред использовали МПБ; 1,5% МПА с 1% водным раствором генцианвиолета; 0,3% и 0,7% МПА. Бактерии рода Aeromonas культивировали в термостате при 27-30 С в течении 18-24 часов на МПБ. Для выделения фагов использовались сточные воды животноводческих помещений Ульяновской области, больниц г. Ульяновска, вода озер и рек Ульяновской области. Фаги выделяли методом агаровых слоев по Грация с предварительным центрифугированием минут 3000 об\мин и фильтрованием через 0,45µm фильтр на установке вакуумной фильтрации фирмы «Миллипор».

Выделение и изучение биологических свойств фагов проводили по общепринятым методикам (2).

В результате исследований нами выделено и селекционировано 2 штамма фагов бактерий Aeromonas hydrophila. На индикаторных штаммах Aeromonas hydrophila, выделенные штаммы фагов образуют круглые, прозрачные колонии Том 3. Актуальные вопросы микробиологии, вирусологии, эпизоотологии и биотехнологии диаметром 0,5 - 1 мм и отсутствием зон неполного лизиса. Литическая активность выделенных фагов по методу Грация от 9106 до 2107, а по методу Аппельмана от 10-5 до 10-7. Для определения спектра литического действия бактериофагов использовали 8 штаммов Aeromonas hydrophila. Установлено, что фаги проявили литическое действие в отношении 80% всех исследованных культур. Обработка хлороформом в соотношении 1:10 в течение 15 минут полностью инактивировали фаги. Обработка фагов температурой 58С - 60С в течении 30 минут приводит к их полной гибели.

С целью конструирования диагностикума в дальнейшем необходимо более детально изучить биологические свойства выделенных фагов.

1. Адамс М. Бактериофаги. – М, 1961. – с.521.

2. Гольдфарб Д.М. Бактериофагия. – М.: Медгиз, 1961. – с.297.

3. Канаева Т.И., Васильев Д.А. Разработка бактериологической схемы диагностики аэромоноза рыб // Проблемы профилактики и борьбы с особо опасными, экзотическими и малоизученными инфекционными болезнями животных:

Труды Международной научно-практической конференции, посвященной 50-летию ВНИИВВиМ, 2-5 декабря 2008. – Покров, 2008. – С.111-114.

4. Ревенко И.П. Бактериофаги и их использование в ветеринарной практике. – Киев: «Урожай», 1978. – с.160. с. 5. Сидоров М.А., Скородумов Д.И., Федотов В.Ф. //Определитель зоопатогенных микроорганизмов. Справочник – М., 1995.- с.227.

УДК 619:578.832.

РАЗРАБОТКА МЕТОДИКИ ВЫЯВЛЕНИЯ СПЕЦИФИЧЕСКОГО УЧАСТКА ДНК

ORNITHOBACTERIUM RHINOTRACHEALE С ПОМОЩЬЮ ПЦР В РЕЖИМЕ

«РЕАЛЬНОГО ВРЕМЕНИ»

DEVELOP A METHODOLOGY TO IDENTIFY SPECIFIC DNA SEQUENCE

ORNITHOBACTERIUM RHINOTRACHEALE BY PCR IN "REAL TIME"

А.С. Разорвина, А.В. Мастиленко, Д.А. Васильев, Н.И. Молофеева, Е.Г. Логинова A.S. Razorvina, A.V. Mastilenko, D.A. Vasilyev, N.I. Molofeevа, E.G. Loginova Научно-исследовательский инновационный центр микробиологии и The research innovation centre of microbiology and biotechnology The aim of this work was the development of specific primers for DNA Ornithobacterium rhinotracheale, the creation and validation of a PCR protocol.



Pages:     | 1 || 3 | 4 |
Похожие работы:

«МИНИСТЕРСТВО ОБРАЗОВАНИЯ РЕСПУБЛИКИ БЕЛАРУСЬ Учреждение образования Брестский государственный университет имени А.С. Пушкина МОНИТОРИНГ ОКРУЖАЮЩЕЙ СРЕДЫ Материалы международной научно-практической конференции Брест, 21–22 октября 2010 года Брест БрГУ имени А.С. Пушкина 2010 2 УДК 502/504:574(07) ББК 20.1 М77 Рекомендовано редакционно-издательским советом Учреждения образования Брестский государственный университет имени А.С.Пушкина Рецензенты: доктор биологических наук, профессор В.Е. Гайдук...»

«Известия Коми научного центра УрО РАН Выпуск 3(15). Сыктывкар, 2013. ХРОНИКА ВСЕРОССИЙСКАЯ НАУЧНАЯ КОНФЕРЕНЦИЯ БИОРАЗНООБРАЗИЕ ЭКОСИСТЕМ КРАЙНЕГО СЕВЕРА: ИНВЕНТАРИЗАЦИЯ, МОНИТОРИНГ, ОХРАНА С 3 по 7 июня 2013 г. в г. Сыктывкар (Республика Коми) состоялась Всероссийская научная конференция Биоразнообразие экосистем Крайнего Севера: инвентаризация, мониторинг, охрана. Инициатор ее проведения – Институт биологии Коми НЦ УрО РАН. Соучредителями выступили Министерство природных ресурсов и охраны...»

«CBD Distr. GENERAL КОНВЕНЦИЯ О БИОЛОГИЧЕСКОМ UNEP/CBD/COP/8/14 РАЗНООБРАЗИИ 15 January 2006 RUSSIAN ORIGINAL: ENGLISH КОНФЕРЕНЦИЯ СТОРОН КОНВЕНЦИИ О БИОЛОГИЧЕСКОМ РАЗНООБРАЗИИ Восьмое совещание Куритиба, Бразилия, 20-31 марта 2006 года Пункт 19 предварительной повестки дня* ГЛОБАЛЬНАЯ ИНИЦИАТИВА ПО УСТАНОВЛЕНИЮ СВЯЗИ, ПРОСВЕЩЕНИЮ И ПОВЫШЕНИЮ ОСВЕДОМЛЕННОСТИ ОБЩЕСТВЕННОСТИ Обзор осуществления программы работы и вариантов по продвижению дальнейшей работы Записка Исполнительного секретаря ВВЕДЕНИЕ...»

«Камчатский филиал Тихоокеанского института географии (KФ ТИГ) ДВО РАН Камчатский научно-исследовательский институт рыбного хозяйства и океанографии (КамчатНИРО) Биология Численность Промысел Петропавловск-Камчатский Издательство Камчатпресс 2010 УДК 338.24:330.15 ББК 28.693.32 Б90 Бугаев В. Ф. Нерка реки Камчатки (биология, численность, промысел). – Петропавловск-Камчатский : Изд-во Камчатпресс, 2010. – 232 с. В достаточно популярной форме представлены научные данные о нерке бассейна реки...»

«Федеральное государственное бюджетное учреждение наук и Биологопочвенный институт Дальневосточного отделения Российской академии наук (БПИ ДВО РАН) Совет молодых ученых БПИ ДВО РАН Дальневосточный федеральный университет (ДВФУ) Школа естественных наук I ВСЕРОССИЙСКАЯ НАУЧНАЯ КОНФЕРЕНЦИЯ Современные исследования в биологии 25 - 27 сентября 2012 г. г. Владивосток МОРФОГЕНЕЗ ДРЕВНЕЙШИХ ПРЕСНОВОДНЫХ МОЛЛЮСКОВ НАДСЕМЕЙСТВА VIVIPAROIDEA (GASTROPODA: ARCHITAENIOGLOSSA) Л.А. ПРОЗОРОВА1, В.В....»

«Уважаемые участники конференции! От имени Дальневосточного государственного технического рыбохозяйственного университета я рад приветствовать вас на очередной Международной научно-технической конференции Актуальные проблемы освоения биологических ресурсов Мирового океана. Я уверен, что в ходе работы мы сможем обсудить множество актуальных тем: совершенствование существующих технологий, нахождение путей оптимизации эксплуатации биоресурсов, исчезновение некоторых видов рыб, а также многие другие...»

«RU/2007/SC/VOLGAWET/3 Законодательное Собрание Ростовской области Администрация Ростовской области Ростоблкомприрода Бюро ЮНЕСКО в Москве Программы ЮНЕСКО МАБ и МГП МАТЕРИАЛЫ международной научно-практической конференции Сохранение биоразнообразия водно-болотных угодий и устойчивое использование биологических ресурсов в степной зоне Ростов-на-Дону 2007 Законодательное Собрание Ростовской области Администрация Ростовской области Ростоблкомприрода Бюро ЮНЕСКО в Москве Программы ЮНЕСКО МАБ и МГП...»

«Министерство сельского хозяйства Российской Федерации ФГОУ ВПО Уральская государственная академия ветеринарной медицины Инновационные подходы к повышению качества продукции АПК 21 марта 2012 г. Материалы международной научно-практической конференции Троицк-2012 УДК: 631.145 И-66 ББК: 65 Инновационные подходы к повышению качества продукции АПК, И-66 21 марта 2012 г. г: материалы междунар. науч.- практ. конф. / Урал. гос. академия вет. медицины. – Троицк: УГАВМ, 2012. – 148 с. Редакционная...»

«CBD Distr. GENERAL UNEP/CBD/COP/10/18 23 August 2010 RUSSIAN ORIGINAL: ENGLISH КОНФЕРЕНЦИЯ СТОРОН КОНВЕНЦИИ О БИОЛОГИЧЕСКОМ РАЗНООБРАЗИИ Десятое совещание Нагоя, Япония, 18-29 октября 2010 года Пункт 4.9 повестки дня ПРИВЛЕЧЕНИЕ К РАБОТЕ СУБЪЕКТОВ ДЕЯТЕЛЬНОСТИ И ОСНОВНЫХ ГРУПП И УЧЕТ ГЕНДЕРНОЙ ПРОБЛЕМАТИКИ Записка Исполнительного секретаря ВВЕДЕНИЕ I. Эффективное осуществление Конвенции зависит от участия и привлечения к работе 1. субъектов деятельности и коренных и местных общин. Об этом...»

«ФОРМА ЗАЯВКИ ПРЕДСТАВЛЕНИЕ МАТЕРИАЛОВ Министерство природных ресурсов и экологии на участие в конференции: Заявки и материалы, объемом до 5 страниц Российской Федерации (включая таблицы, рисунки и библиографический Фамилия Управление Федеральной службы список), принимаются в печатном и электронном по надзору в сфере природопользования виде до 12 мая 2014 г. по Кировской области Имя Федеральное государственное бюджетное Электронный вариант: стандартный формат Word учреждение Государственный...»

«Камчатский филиал Тихоокеанского института географии (KФ ТИГ) ДВО РАН Камчатский научно-исследовательский институт рыбного хозяйства и океанографии (КамчатНИРО) Биология Численность Промысел Петропавловск-Камчатский Издательство Камчатпресс 2009 ББК 28.693.32 Б90 УДК 338.24:330.15 В. Ф. Бугаев, А. В. Маслов, В. А. Дубынин. Озерновская нерка (биология, численность, промысел). Петропавловск-Камчатский : Изд-во Камчатпресс, 2009. – 156 с. В достаточно популярной форме представлены научные данные о...»

«Институт систематики и экологии животных СО РАН Териологическое общество при РАН Новосибирское отделение паразитологического общества при РАН ВСЕРОССИЙСКАЯ НАУЧНАЯ КОНФЕРЕНЦИЯ АКТУАЛЬНЫЕ ПРОБЛЕМЫ СОВРЕМЕННОЙ ТЕРИОЛОГИИ 18–22 сентября 2012 г., Новосибирск Тезисы докладов Новосибирск 2012 УДК 599 ББК 28.6 А43 Конференция организована при поддержке руководства ИСиЭЖ СО РАН и Российского фонда фундаментальных исследований (грант № 12-04-06078-г) Редакционная коллегия: д.б.н. Ю.Н. Литвинов...»

«l=2!,=/ VI b“!%““,L“*%L *%/-*%.-!.,, C% %./ =*!%-,2= chdpnan`mhj` 2005 РОССИЙСКАЯ АКАДЕМИЯ НАУК Институт биологии внутренних вод им. И. Д. Папанина Материалы VI Всероссийской школы-конференции по водным макрофитам ГИДРОБОТАНИКА 2005 Борок, 11—16 октября 2005 г. Рыбинск 2006 ББК 28.082 Материалы VI Всероссийской школы-конференции по водным макрофитам Гидроботаника 2005 (пос. Борок, 11—16 октября 2005 г.). Рыбинск: ОАО Рыбинский Дом печати, 2006. 382 с. ISBN Сборник материалов включает доклады...»

«РОССИЙСКАЯ АКАДЕМИЯ НАУК УРАЛЬСКОЕ ОТДЕЛЕНИЕ РАН КОМИ НАУЧНЫЙ ЦЕНТР ИНСТИТУТ БИОЛОГИИ КОМИ ОТДЕЛЕНИЕ РБО МИНИСТЕРСТВО ПРИРОДНЫХ РЕСУРСОВ И ОХРАНЫ ОКРУЖАЮЩЕЙ СРЕДЫ РЕСПУБЛИКИ КОМИ УПРАВЛЕНИЕ РОСПРИРОДНАДЗОРА ПО РЕСПУБЛИКЕ КОМИ РОССИЙСКИЙ ФОНД ФУНДАМЕНТАЛЬНЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ Всероссийская конференция БИОРАЗНООБРАЗИЕ ЭКОСИСТЕМ КРАЙНЕГО СЕВЕРА: ИНВЕНТАРИЗАЦИЯ, МОНИТОРИНГ, ОХРАНА Материалы докладов 3-7 июня 2013 г. Сыктывкар, Республика Коми, Россия Сыктывкар, УДК 574.4:504(470-17+98) (063) ББК...»

«Вестник МГТУ, том 11, №4, 2008 г. стр.609-626 УДК 57.02:271.2 Человек и биологическое разнообразие: православный взгляд на проблему взаимоотношений В.К. Жиров Полярно-альпийский ботанический сад-институт Кольского научного центра РАН, кафедра геоэкологии Апатитского филиала МГТУ Аннотация. В настоящее время проблема сохранения биоразнообразия (БР), продекларированная в 1992 г. на Всемирной Конференции в Рио-де-Жанейро, становится центральной в сфере охраны природы и рационального...»

«НАЦИОНАЛЬНАЯ АКАДЕМИЯ НАУК УКРАИНЫ СОВЕТ БОТАНИЧЕСКИХ САДОВ И ДЕНДРОПАРКОВ УКРАИНЫ НАУЧНЫЙ ЦЕНТР ЭКОМОНИТОРИНГА И БИОРАЗНООБРАЗИЯ МЕГАПОЛИСА НАЦИОНАЛЬНЫЙ БОТАНИЧЕСКИЙ САД ИМ. Н.Н. ГРИШКА Международная научная конференция РОЛЬ БОТАНИЧЕСКИХ САДОВ И ДЕНДРОПАРКОВ В СОХРАНЕНИИ И ОБОГАЩЕНИИ БИОЛОГИЧЕСКОГО РАЗНООБРАЗИЯ УРБАНИЗИРОВАННЫХ ТЕРРИТОРИЙ 28-31 мая 2013 года Первое информационное письмо КИЕВ – 2012 ГЛУБОКОУВАЖАЕМЫЕ КОЛЛЕГИ! Приглашаем вас принять участие в работе Международной научной...»

«UNEP/CBD/COP/7/21 Страница 112 Приложение РЕШЕНИЯ, ПРИНЯТЫЕ СЕДЬМЫМ СОВЕЩАНИЕМ КОНФЕРЕНЦИИ СТОРОН КОНВЕНЦИИ О БИОЛОГИЧЕСКОМ РАЗНООБРАЗИИ Решение Страница VII/1. Биологическое разнообразие лесов 113 VII/2. Биологическое разнообразие засушливых и субгумидных земель 114 VII/3. Биологическое разнообразие сельского хозяйства 124 VII/4. Биологическое разнообразие внутренних водных экосистем 125 VII/5. Морское и прибрежное биологическое разнообразие 159 VII/6. Процессы проведения оценок 216 VII/7....»

«Материалы второй Международной научно-рактической интернет-конференции Лекарственное растениеводтво:от опыта прошлого к современным технологиям - Полтава, 2013 УДК: 634.739 Курлович Т.В., кандидат биол. наук, ГНУ Центральный ботанический сад НАН Беларуси ОСОБЕННОСТИ ВЫРАЩИВАНИЯ И ЛЕКАРСТВЕННЫЕ СВОЙСТВА КЛЮКВЫ КРУПНОПЛОДНОЙ Резюме: В ягодах клюквы содержится значительное количество биологически активных веществ (витаминов, сахаров, пектина, органических кислот, полифенолов, тритерпеноидов), а...»

«Материалы второй Международной научно-рактической интернет-конференции Лекарственное растениеводтво:от опыта прошлого к современным технологиям - Полтава, 2013 УДК 58(470.57) Миронова Л.Н., заведующая лабораторией Шипаева Г.В., научный сотрудник, Реут А.А., научный сотрудник Федеральное государственное бюджетное учреждение науки Ботанический сад-институт Уфимского научного центра РАН, Республика Башкортостан СОСТОЯНИЕ И ПЕРСПЕКТИВЫ ИНТРОДУКЦИИ ПРЕДСТАВИТЕЛЕЙ РОДА OENOTHERA L. В РЕСПУБЛИКЕ...»

«1-е информационное письмо Федеральное агентство научных организаций Российская академия наук Всероссийский научно-исследовательский институт биологической защиты растений Министерство сельского хозяйства и перерабатывающей промышленности Краснодарского края Министерство образования и науки администрации Краснодарского края ВПРС Международной организации по биологической борьбе с вредными животными и растениями (МОББ) Российская Технологическая Платформа Биоиндустрия и Биоресурсы – БиоТех2030...»









 
2014 www.konferenciya.seluk.ru - «Бесплатная электронная библиотека - Конференции, лекции»

Материалы этого сайта размещены для ознакомления, все права принадлежат их авторам.
Если Вы не согласны с тем, что Ваш материал размещён на этом сайте, пожалуйста, напишите нам, мы в течении 1-2 рабочих дней удалим его.