WWW.KONFERENCIYA.SELUK.RU

БЕСПЛАТНАЯ ЭЛЕКТРОННАЯ БИБЛИОТЕКА - Конференции, лекции

 

Pages:   || 2 | 3 | 4 |

«13-я МЕЖДУНАРОДНАЯ ПУЩИНСКАЯ ШКОЛА-КОНФЕРЕНЦИЯ МОЛОДЫХ УЧЕНЫХ 28 СЕНТЯБРЯ – 2 ОКТЯБРЯ 2009 ГОДА СБОРНИК ТЕЗИСОВ Пущино 2009 РОССИЙСКАЯ АКАДЕМИЯ НАУК ПУЩИНСКИЙ НАУЧНЫЙ ЦЕНТР РАН ...»

-- [ Страница 1 ] --

РОССИЙСКАЯ АКАДЕМИЯ НАУК

ПУЩИНСКИЙ НАУЧНЫЙ ЦЕНТР РАН

АДМИНИСТРАЦИЯ Г. ПУЩИНО

ИНСТИТУТ БИОФИЗИКИ КЛЕТКИ РАН

ПУЩИНСКИЙ ГОСУДАРСТВЕННЫЙ УНИВЕРСИТЕТ

13-я МЕЖДУНАРОДНАЯ ПУЩИНСКАЯ

ШКОЛА-КОНФЕРЕНЦИЯ МОЛОДЫХ УЧЕНЫХ

28 СЕНТЯБРЯ – 2 ОКТЯБРЯ 2009 ГОДА

СБОРНИК ТЕЗИСОВ

Пущино 2009

РОССИЙСКАЯ АКАДЕМИЯ НАУК

ПУЩИНСКИЙ НАУЧНЫЙ ЦЕНТР РАН

АДМИНИСТРАЦИЯ Г. ПУЩИНО

ИНСТИТУТ БИОФИЗИКИ КЛЕТКИ РАН

ПУЩИНСКИЙ ГОСУДАРСТВЕННЫЙ УНИВЕРСИТЕТ

13-я ПУЩИНСКАЯ МЕЖДУНАРОДНАЯ

ШКОЛА-КОНФЕРЕНЦИЯ МОЛОДЫХ УЧЕНЫХ

28 СЕНТЯБРЯ – 2 ОКТЯБРЯ 2009 ГОДА

СБОРНИК ТЕЗИСОВ

Пущино Проведение школы-конференции и публикация тезисов осуществлены при поддержке Российского фонда фундаментальных исследований Мирошников А.И., академик, Председатель ПНЦ РАН - председатель Овчинников Л.П., академик, директор ИБ РАН Шувалов В.А, академик, директор ИФПБ РАН Боронин А.М., член-корр. РАН, директор ИБФМ РАН, Фесенко Е.Е., член-корр. РАН, директор ИБК РАН Иваницкий Г.Р., член-корр. РАН, директор ИТЭБ РАН Кудеяров В.Н., д.б.н., проф., директор ИФХБПП РАН Пермяков Е.А., д.б.н., проф., директор ИБП РАН Лахно В.Д., д.ф-м.н., директор ИМПБ РАН Дагкесаманский Р.Д., д.ф-м.н., директор ПРАО АКЦ ФИАН Вайнштейн М.Б., д.б.н., проф., ректор ПущГУ Шорохов В.В., к.б.н., заместитель Главы администрации города Пущино Комаров В.М., д.ф.-м.н., ИБК РАН – председатель Лукьянов А.М., Администрация г.Пущино – зам. председателя Петрова Р.Р., к.б.н., ИБК РАН – зам. председателя Назарова Г.Н., к.б.н., ученый секретарь ПНЦ РАН;

Буданова Е.Н., к.б.н., ИБК РАН – секретарь Мубаракшина Э.К., ИБК РАН – секретарь Хораськина Ю.С., ИФХБПП РАН – секретарь Шанин В.Н., ИФХБПП РАН Плахотин А.Н., ИБК РАН Запрудина М.В.

Шапырина Е.В, ИБФМ РАН – секция «Молекулярная биология»

Осипенко М.А. к.б.н., ИБК РАН – секция «Общая и функциональная биохимия»

Мальцева В.Н., к.б.н., ИБК РАН – секция «Физиология животных и биомедицина»

Храмцова Е.А., ИБК РАН, – секция «Биофизика клетки, органов и систем»

Самаркина О.Н., ФИБХ РАН – секция «Прикладная биотехнология»

Фурсова К.К., ФИБХ РАН – секция «Прикладная биотехнология»

Антонова О.Ю., ИБП РАН, ПущГУ – секция «Биомедицинская инженерия»

Лаптева Ю.С., ИБФМ РАН – секция «Биология и экология микроорганизмов»

Квиткина А.К., ИФХБПП РАН, ПущГУ – секция «Экология растений и животных»

Темралеева А.Д., ИФХБПП РАН – секция «Экология растений и животных»

Соболев Е.В., ИМПБ РАН – секция «Математические проблемы биологии»

Сапронов Д.В., к.б.н., ИФХБПП РАН – секция «Почвоведение и биогеохимия»

Кубасова Т.С., к.б.н., «Пущинский музей экологии и краеведения» – секция «Социокультурная ниша биологии»

УДК 573.4; 574.6; 577.1; 577.2; 577.3; 577.4; 581.5; 591.1; 631. БИОЛОГИЯ – НАУКА ХХI ВЕКА: 13-я Пущинская международная школаконференция молодых ученых, (Пущино, 28 сентября - 2 октября 2009 года). Сборник тезисов.

Международная школа-конференция молодых ученых – ежегодное научное мероприятие, организуемое и проводимое Пущинским научным центром РАН, институтами ПНЦ, администрацией г. Пущино, Пущинским государственным университетом на базе Пущинского научного центра Российской академии наук

. Целью школы-конференции является ознакомление молодых ученых с перспективами и новейшими достижениями в области физико-химической биологии.

Работа школы-конференции проводится в форме пленарных и секционных заседаний по следующим направлениям: молекулярная биология, общая и функциональная биохимия, биофизика и биомедицина, биология и экология микроорганизмов, почвоведение и биогеохимия, экология животных и растений, математическая биология, прикладная биотехнология. Пленарные заседания включают в себя лекции ведущих российских ученых, охватывающие перспективные направления физико-химической биологии; молодые исследователи имеют возможность доложить результаты своей работы в форме устных сообщений и стендовых докладов в ходе секционных заседаний. Помимо научных мероприятий в программу работы школы-конференции входят экскурсии по институтам ПНЦ РАН, выставки научного оборудования, круглые столы-диспуты по актуальным проблемам современной науки, культурная программа.

В работе школы-конференции ежегодно принимают участие более 500 молодых исследователей из городов Росси, стран СНГ и дальнего зарубежья Молекулярная биология

МОЛЕКУЛЯРНАЯ БИОЛОГИЯ

СОДЕРЖАНИЕ ВНЕКЛЕТОЧНОЙ МИТОХОНДРИАЛЬНОЙ ДНК С МУТАЦИЯМИ

РЕЗКО ПОВЫШЕНО В ПЛАЗМЕ КРОВИ ОБЛУЧЕННЫХ МЫШЕЙ

Абдуллаев С.А., Антипова В.Н., Газиев А.И.

Институт теоретической и экспериментальной биофизики РАН, Пущино (Россия).

E-mail: abdullaev.iteb@rambler.ru Циркулирующие нуклеиновые кислоты в плазме крови и в других биологических жидкостях представляют интерес как потенциальные маркеры для диагностики различных патологий и мониторинга стрессовых воздействий. Для многих генотоксических агентов митохондриальная ДНК (мтДНК) является более уязвимой мишенью, чем ядерная ДНК и мутации митохондриального генома могут быть связаны с развитием ряда заболеваний. В настоящем исследовании мы определяли внеклеточную мтДНК с мутациями в плазме крови мышей, подвергнутых воздействию рентгеновским излучением в дозе 5 Гр. Мутации определяли по расщеплению CEL-эндонуклеазой (фермент специфически расщепляющий неспаренные основания) гетеродуплексов, получаемых путем гибридизации ПЦР-ампликонов мтДНК (ген ND3 и D-loop регион) из плазмы крови облученных и контрольных мышей.



Изменение общего количества копий мтДНК (по гену ND4) относительно ядерной ДНК (ген GAPDH) определяли методом ПЦР в реальном времени. Результаты показали, что метод расщепления гетеродуплексов CEL-эндонуклеазой позволяет провести скрининг неизвестных мутаций, индуцируемых ионизирующей радиацией. Анализ результатов указывает наличие повышенного уровня мтДНК с мутациями в плазме крови облученных мышей в течение месячного пострадиационного периода. Однако уровень содержания мтДНК с мутациями в плазме крови этих мышей не одинаков во все сроки (1, 4, 8, 14, 28 дни) анализа после их облучения. Наибольший уровень мтДНК с мутациями в плазме крови мышей выявляется на 14й день после их облучения. Повышенное содержание внеклеточной мтДНК с мутациями в плазме крови, обнаруженное нами у мышей подвергнутых рентгеновскому облучению, можно рассматривать как чувствительный биомаркер для оценки радиационного поражения и действия других генотоксических агентов.

БИОХИМИЧЕСКИЙ АНАЛИЗ СЕМЯН ТРАНСФОРМИРОВАННЫХ (Trn) РАСТЕНИЙ

Абдуллаева Д.А.

Научно-производственный центр «Ботаника» АН РУз, Ташкент (Узбекистан).

E-mail: botany@uzsci.net Повышенный интерес к методам биотехнологии обусловлен возможностью преодоления природных барьеров между нескрещиваемыми видами и родами. Из пророщенной пыльцы были выделены клетки-спермии Hibiscus syriacus L. и методом инъекции введены в завязь цветков Gossypium hirsutum L. Таким методом получена форма хлопчатника Trn.

Цель исследования - электрофоретическая характеристика тотальных белков семян родительских форм и экспериментальных (Trn) растений.

Материал исследований: G.hirsutum L. (сорт Юлдуз), H.syriacus L. и трансформированные растения (Trn1-Trn3). Из обезжиренной муки семян хлопчатника экстрагировали тотальную фракцию белков для электрофореза в градиенте 10-17% ПААГ.

В результате электрофоретического анализа спектра тотальных белков семян G.hirsutum и H.syriacus выявлены некоторые отличия. В спектре белков семян H.syriacus имеются три минорные фракции с Rf 0.30, 0.32 и 0.34. У G.hirsutum в этой области отмечаются две высокомолекулярные мажорные фракции с Rf 0.30 и 0.33. В спектре белков семян H.syriacus выявлена одна средняя фракция с Rf 0.62. Для G.hirsutum в этой области характерно присутствие двух средней фракции с Rf 0.58 и 0.59. Спектр тотальных белков семян первого поколения значительно похож на спектр белков материнской формы (G.hirsutum).

У образцов второго поколения, основные белки повторяют картину распределения родительского образца G.hirsutum. Но средние фракции, имеющиеся у Trn1 поколения с Rf 0. и 0.65, во Trn2 поколении объединяются как одной слабо мажорной фракции. У F3 поколении это фракция становится одной мажорной фракцией с Rf 0.65. На электрофореграммах тотальных белков семян растений Trn2 проявляется также фракция с Rf 0.75, не выявленная у родительских образцов.

СОЗДАНИЕ КОЛЛЕКЦИИ ЛИНИЙ МУШЕК DROSOPHILA MELANOGASTER,

ЭКСПРЕССИРУЮЩИХ ПРОТООНКОГЕНЫ ЧЕЛОВЕКА

Аверков В.С., Хаустов С.А., Катанаев В.Л.

Институт белка РАН, Пущино (Россия).

E-mail: kontemerling@gmail.com В настоящее время все большую популярность приобретает построение моделей раковых опухолей на мушках Drosophila melanogaster. Сигнальные белки многоклеточных животных крайне консервативны. При избыточной экспрессии они вызывают нарушения деления и дифференцировки, как в клетках человека, так и в клетках мух. Современные методы позволяют не только встроить в геном мух любой интересующий ген, но и запустить его экспрессию в интересующем органе. Встраивая в геном мухи гены человека, и отбирая гены, экспрессия которых нарушает развитие фасетчатого глаза, мы реализуем простую и удобную в изучении модель поиска протоонкогенов человека. В ходе первого этапа исследований было получено 40 линий трансформантов, из которых 8 были охарактеризованы как “рыхлоглазые”, то есть встроенный ген нарушал развитие фасетчатого глаза. После завершения оптимизации процедур выделения ДНК и амплификации встроенной последовательности мы планируем секвенировать встроенные гены. В ходе проведения дальнейших исследований мы планируем создать полную коллекцию мух, экспрессирующих потоонкогены человека.

ИССЛЕДОВАНИЕ ФУНКЦИОНИРОВАНИЯ ШАПЕРОНА HSP104 В ДРОЖЖАХ

SACCHAROMYCES CEREVISIAE

Антонец К.С., Рубель А.А.,Сайфитдинова А.Ф.1, Санкт-Петербургский государственный университет, Санкт-Петербург (Россия), Санкт-Петербургский филиал института общей генетики им. Н.И. Вавилова РАН, СанктПетербург (Россия).

E-mail: kir_ant@mail.ru Дрожжевой шаперон Hsp104, относящийся к семейству ClpB, с молекулярной массой около 102 kDa, содержит два нуклеотид-связывающих АТФазных и один белок-связывающий домены и образует гексамеры. При нормальных условиях роста он продуцируется в небольших количествах, но при тепловом шоке его продукция значительно усиливается. В клетках дрожжей Hsp104 отвечает за развитие термотолерантности и за выживаемость клеток при повышенной температуре. Вместе с шаперонами из семейства Hsp70 он взаимодействует с неправильно уложенными белками и обеспечивает их дизаггрегацию и рефолдинг.





Дизагрегазная активность Hsp104 обеспечивает размножение и поддержание дрожжевых прионов, в том числе [PSI]. Недавно были обнаружены новые функции дрожжевого шаперона Hsp104, среди которых РНК-связывающая активность и участие в регуляции экспрессии генов на посттранскрипционном уровне, однако детально они не изучены. С целью исследовать функционирование шаперона Hsp104 была получена многокопийная плазмида с дрожжевым урациловым маркером, несущая последовательность гена HSP104 под контролем конститутивного промотора GPD. После трансформации этой плазмидой дрожжи штамма GT81C утратили [PSI+] фенотип и не росли на селективной среде без аденина. В полученную плазмиду перед геном HSP104 был вставлен фрагмент, несущий две тандемно повторенные последовательности, кодирующие красный флуоресцирующий белок DsRed2N-1. Продукция слитного белка в штамме GT81C привела сначала к усилению нонсенс супрессии, а после нескольких пассажей к утрате [PSI+] фенотипа, что свидетельствует о включении гибридного белка в состав гексамеров Hsp104. Полученная конструкция позволит расширить информацию о сложной структуре Hsp104, его локализации и системах регуляции биологических процессов, в которые он вовлечен.

ПОЛИМОРФИЗМ ГЕНА ЦИТОХРОМА b РАЗЛИЧНЫХ ПОПУЛЯЦИЙ БЕРКУТА

AQUILA CHRYSAETOS

Ахметоллаев И.А., Чиркин А.П., Куламетов Ж.А., Искакова Г.А., Айтхожина Н.А.

Институт молекулярной биологии и биохимии им. М.А. Айтхожина, Алматы (Казахстан).

E-mail: iliyas@mail.ru Для точного определения и идентификации подвидов беркута, обитающего на территории Казахстана и Киргизии, был проанализирован полиморфизм гена цитохрома b у представителей вида Aquila chrysaetos. Было исследовано 7 популяций, не связаных друг с другом кормовыми угодьями и путями миграции. ДНК выделяли из крови набором DNAmicroKit(QIAGEN). Сиквенирование гена цитохрома b проводили на аппарате ALFexpress II с последующей обработкой результатов с помощью пакета программ PAUP*4.0b10 и MEGA2. По результатам кластеризации было показано, что популяции формируются в две группы фенотипов с минимальным значением генетического сходства 0.58, при этом популяция Sagynbai 4 наиболее отдалена от остальных популяций. Один кластер образуют популяции Alik1 и Hotel со степенью генетического сходства 0.92, к ним примыкает популяция N 5 со степенью сходства 0.85. Второй кластер представлен популяциями Sagynbai 1 и Sagynbai 3 со степенью 0.88 и подкластером Sagynbay 5 со степенью 0.81. Популяции Sagynbai 1, Sagynbai 3, Sagynbay 5 объединяются в группу с относительно одинаковыми степенями сходства между собой. Это может свидетельствовать о принадлежности этих популяций к одному подвиду. Птицы Аlik1 и Hotel образуют отдельную популяцию, популяция N занимает промежуточное положение.

В результате проведенных исследований показано, что полиморфизм гена цитохрома b достаточно надежно дифференцирует популяции беркутов Aquila chrysaetos, обитающих на территории Казахстана и Кыргызстана.

ПОИСК И КЛОНИРОВАНИЕ МИКРОСАТЕЛЛИТНЫХ ЛОКУСОВ РЕЛИКТОВОГО

ЗЕМНОВОДНОГО – RANADON SIBIRICUS

Ахметоллаев И.А., Чиркин А.П., Юркевич Н.А., Исмагулова Г.А., Айтхожина Н.А.

Институт молекулярной биологии и биохимии им. М.А. Айтхожина, Алматы (Казахстан).

E-mail: iliyas@mail.ru Современные методы обнаружения и изучения гипервариабельных микросателлитов внесли значительный вклад в молекулярно-генетические исследования многих видов живых организмов. Исследование полиморфизма микросателлитных локусов ДНК семиреченского лягушкозуба Ranodon sibiricus может стать наиболее информативным подходом в популяционной и эволюционной биологии этой редкой амфибии, так как на сегодняшний день генетическая вариабельность семиреченского лягушкозуба ограничена полиморфизмом митохондриальной ДНК. Нами была предпринята попытка получить, клонировать и определить первичную структуру нескольких семейств ди-, три- и тетрануклеотидных повторов. Фрагменты ДНК. содержащие микросателлиты (AG)12, (TG)12, (AAC)6, (AAG)8, (AAT)12, (ACT)12, (ATC)8, (AAAC)6, (AAAG)6, (AATC)6, (AATG)6, (ACAG)6, (ACCT)6, (ACTC)6 и (ACTG)6, вычитали из тотальной ДНК лягушкозуба, расщепленной рестриктазами RsaI и HaeIII. Вычитание проводили биотинилированными зондами с использованием магнитных частиц с иммобилизованным стрептоавидином. Полученные фрагменты клонировали в Твекторе на основе вектора pBluescript II KS(+). В результате были идентифицированы свыше 560 клонов, содержащих исследуемые повторы. Установлено, что микросателлиты (AATC)6, (AAC)6и (AATG)6 образуют семейства с разной локализацией в геноме. На исследованные тандемные повторы подобраны фланкирующие праймеры, которые в дальнейшем будут использованы в изучении ДНК полиморфизма различных популяций семиреченского лягушкозуба Джунгарского Алатау.

ТРАНСКРИПЦИОННЫЙ ПРОФИЛЬ ОПЕРОНА oppABCDF

Ашихмина А.А., Озолинь О.Н.

Институт биофизики клетки РАН, Пущино (Россия).

E-mail: madle_@mail.ru Оперон oppABCDF кодирует пять белков транспорта олигопептидов. Способ регуляции их экспрессии пока не установлен, хотя перед опероном есть сайт связывания регулятора транскрипции Lrp. Предполагается, что мРНК синтезируются с общего промотора, находящегося перед геном oppA, хотя между oppA и oppB находится терминатор, снижающий транскрипцию следующих генов, и являющийся потенциальной мишенью для регуляторного воздействия. Содержание в клетках РНК гена oppB почти на порядок ниже, чем oppA-мРНК (наши и литературные данные экспрессионного анализа), но количество oppD-мРНК достоверно выше, чем oppB-мРНК. Так как по стабильности эти мРНК не отличаются, было высказано предположение, что перед геном oppD находится дополнительный промотор. Его поиск был осуществлен с помощью алгоритма PlatProm, который обнаружил 2 потенциальных промотора, находящихся внутри гена oppB. Активность одного из них (oppB1c) была исследована в данной работе.

Было установлено, что фрагмент ДНК, содержащий oppB1c, эффективно связывается с РНК-полимеразой in vitro. Для того, чтобы исследовать его способность инициировать синтез РНК in vivo, oppB1c был встроен в безпромоторную плазмиду pET28b-eGFP перед геном зеленого флуоресцентного белка (GFP). Флуоресцентный сигнал для клеток, трансформированных этой плазмидой, оказался в 3,1±0,7 раз выше, чем для клеток, несущих исходную плазмиду. Это значит, что oppB1c способен не только взаимодействовать с РНКполимеразой, но и инициировать синтез РНК. Особенностью его нуклеотидной последовательности, отличающей oppB1c от oppA, является наличие мотива GCGCC перед стартом транскрипции. Так как такой мотив обычно присутствует в промоторах, подверженных негативной регуляции в условиях аминокислотного голодания, oppB1c может не только активировать транскрипцию генов oppC, oppD и oppF, но и обеспечить такую зависимость их экспрессии от условий роста, которая отличается от других генов оперона.

Работа поддержана грантом РФФИ 07-04-01066.

БЕЛОК L25 СТАБИЛИЗИРУЕТ СТРУКТУРУ ФУНКЦИОНАЛЬНО ВАЖНОГО

УЧАСТКА БАКТЕРИАЛЬНОЙ РИБОСОМЫ

Баженова М.В., Корепанов А.П., Гарбер М.Б., Гонгадзе Г.М.

Институт белка РАН, Пущино (Россия).

E-mail: mvbaz@rambler.ru Недавно нами показано, что при нокауте гена рибосомного белка L25 клетки E. coli замедляют свой рост, а рибосомы этого штамма обладают низкой эффективностью в синтезе природных полипептидов. Эти рибосомы содержат все компоненты, кроме белка L25, но только половина delta L25 рибосомных субчастиц находится ассоциированном состоянии in vitro. Хотя белок L25 в рибосоме взаимодействует только с 5S рРНК и белком L16, однако эти две молекулы контактируют со многими компонентами рибосомы. Поэтому нами были начаты исследования изменений в структуре delta-L25 рибосом. Год назад методом химического пробинга мы обнаружили в delta-L25 рибосомах ряд нуклеотидов с измененной реактивностью в домене II 23S рРНК и в 5S рРНК. На сегодняшний день нами уточнены данные для домена II и исследована значительная часть домена V 23S рРНК. В 50S субчастицах, находящихся в составе рибосом, изменения найдены в спиралях 38, 39, 41, 42 и 89 23S рРНК и в петле E 5S рРНК. Во фракции 50S субчастиц, не способных ассоциировать с 30S субчастицами, изменения в указанных областях усиливаются и появляются дополнительные изменения (спирали: 37, 80, 81, 86, 88, 89). Кроме того, фракция диссоциированных delta-L25 50S субчастиц утрачивает белок L16. Все участки 23S рРНК, изменившие доступность модификантам в delta-L рибосомных 50S субчастицах, в бактериальной рибосоме формируют межмолекулярные контакты с 5S рРНК-белковым комплексом или с белком L16. Поэтому мы предполагаем, что белок L25 необходим для стабилизации в рибосоме структурно-функционального узла, состоящего из 5S рРНК-белкового комплекса, белка L16 и участков доменов II и V 23S рРНК.

Работа выполнена при поддержке Российской Академии Наук, грантов РФФИ № 08-04и Программы Президента РФ по поддержке Ведущих научных школ (НШ-751.2008.4).

Работа М.Б. Гарбер поддерживалась грантом Медицинского Института Говарда Хьюза (HHMI 55005609).

ПОЛУЧЕНИЕ И ИЗУЧЕНИЕ ОБРАЗОВАНИЯ АМИЛОИДНЫХ СТРУКТУР

ИСКУССТВЕННОГО БЕЛКА АЛЬБЕБЕТИНА С ЗАМЕНОЙ H65F

Балобанов В.А1., Анисимов Я.С1., Черткова Р.В2., Ильина Н.Б1., Васильев В.Д., Бычкова В.Е. Институт белка РАН, Пущино (Россия), Институт биоорганической химии им. Шемякина и Овчинникова, Москва (Россия).

E-mail: uralm62@rambler.ru Изучение процесса амилоидообразования на сегодняшний день является одной из самых актуальных проблем в мировой науке. Предполагается, что в образовании амилоидных структур ключевую роль играют частично свёрнутые состояния структуры белка.

Искусственный белок альбебетин изначально находится именно в таком частично свёрнутом состоянии. В ходе данной работы нами получена мутантная форма альбебетина с заменой H65F, которая, по результатам теоретических исследований, должна приводить к усилению амилоидогенности. Процесс образования амилоидов полученным белком был изучен при помощи методов КД в дальней ультрафиолетовой области, тиофлавиновой флуоресценции и электронной микроскопии. Мутантная форма белка образует амилоиды быстрее исходного белка, что соответствует теоретическому предсказанию. Исследование влияния внешних условий показало, что понижение температуры приводит к замедлению процесса амилоидообразования, а повышение ионной силы раствора - к более эффективному росту амилоидных агрегатов.

Работа поддержана программой МКБ РАН, грантами РФФИ(09-04-01348), INTAS(05и HHMI(55005607) А.В. Финкельштейна.

ПОЛУЧЕНИЕ ВЫСОКОЧИСТЫХ ПРЕПАРАТОВ ТРАНСКРИПТА тРНКPro БАКТЕРИИ

ENTEROCOCCUS FAECALIS

Бояршин К.С., Крикливый И.А., Яремчук А.Д., Тукало М.А.

Институт молекулярной биологии и генетики НАН Украины, Киев (Украина).

E-mail: kboyarshin@mail.ru Данная работа посвящена приложению передовых методов экспрессии и очистки индивидуальных тРНК для получения высокочистых препаратов транскрипта тРНКPro бактерии Enterococcus faecalis. Распространённым способом получения транскриптов тРНК является их экспрессия с генноинженерных конструкций in vitro с применением РНК-полимеразы бактериофага Т7. Но бактериальные тРНКPro характеризуются наличием цитозина на 5'-конце молекулы, что затрудняет инициацию транскрипции Т7-полимеразой.

Эффективным подходом для решения проблемы 5'-концевого цитозина стало использование коэкспрессии тРНК с молотоглавым цис-гидролитическим рибозимом вируса круглой пятнистости табака (tobacco ringspot virus) на 5'-конце. После предварительной хроматографической очистки транскрипта на ионообменном сорбенте DEAE-Toyopearl автокаталитическое расщепление индуцировалось циклическим плавлением-отжигом в присутствии ионов Mg2+. Для хроматографической очистки транскрипта методом ВЭЖХ использовали ионообменную колонку WAX-1S, содержащую DEAE-полиметакрилат, что позволило отделить в градиенте NaCl транскрипт тРНК от рибозима и остатков ковалентного комплекса тРНК-рибозим.

Конечный выход транскрипта тРНК с 1 мг ДНК-матрицы составил 0,8 мг. Акцепторная активность полученного транскрипта тРНК подтверждена в тесте на аминоацилирование, чистота препаратов проверена методом электрофореза в полиакриламидном геле и составила более 95%. Разработанный метод может быть внедрён в лабораторную практику и лечь в основу методов для получения транскриптов других тРНК.

АНАЛИЗ СТРУКТУРЫ БАЗОВОГО РЕПЛИКОНА ПЛАЗМИДЫ БИОДЕГРАДАЦИИ

Волкова О.В., Кошелева И.А.

Институт биохимии и физиологии микроорганизмов, Пущино (Россия), Пущинский государственный университет, Пущино (Россия).

E-mail: volkova_o_v@inbox.ru Известно, что генетические системы, контролирующие биодеградацию нафталина и некоторых других ПАУ псевдомонадами, в большинстве случаев локализованы на крупных коньюгативных плазмидах, относящихся к Р-2, Р-7 и Р-9 группам несовместимости.

Принадлежность плазмиды к той или иной группе несовместимости, круг бактериальных хозяев, а следовательно и судьба генов биодеградации в конкретных микрокосмах определяется в основном свойствами ее базового репликона. К настоящему моменту достаточно детально разработана классификация плазмид Inc P-9 группы, в то время как о плазмидах Р-7 группы доступна лишь скудная информация.

Для облегчения изучения генетических детерминант поддержания Inc P-7 плазмид целесообразно получение базовых репликонов, включающих минимальный набор участков ДНК и генов, обеспечивающих независимую репликацию и стабильное поддержание плазмиды. Для получения таких репликонов была избрана стратегия лигирования Hind III – или Sau 3A-рестриктов плазмид Inc P-7 группы с кассетами, детерминирующими устойчивость к тетрациклину или гентамицину, выщепленными из p34S-Tc или p34S-Gm, соответственно.

Полученные конструкты с помощью электропорации вводились в штаммы Pseudomonas putida KT2442 (gfp, KmR) и BS394 (Cys-). Данным способом были получены клоны P. putida BS394, устойчивые к тетрациклину и содержащие фрагмент (примерно 7 kb) плазмиды биодеградации нафталина pFME5 (80 kb, выделена из P. fluorescens FME5 ), способный к автономной репликации и стабильному поддержанию в данном хозяине.

На основе анализа известных нуклеотидных последовательностей базовых репликонов Inc P-7 группы были разработаны несколько пар праймеров, позволивших подтвердить наличие характерных участков ДНК в полученном репликоне (pFME5mini): repA, ori, parC и parA.

Секвенирование pFME5mini с дальнейшим делеционным анализом позволит детально изучить генетический контроль поддержания pFME5 в различных бактериальных хозяевах, а совместно с исследованием подобных генетических кластеров других Inc P-7 плазмид -создать основы для системы классификации плазмид данной группы несовместимости.

СТРУКТУРНЫЕ ОСОБЕННОСТИ МЕТИЛИРОВАНИЯ ГЕНОМА ЧЕЛОВЕКА ПРИ

ЛЕЙКОЗАХ

Вшивцева Е.Н., Вологжанникова А.А.1,2, Исмаилов Р.Г1,2., Маринич Д.В.3, Дьяченко О.В.2, Шевчук Т.В.2, Бурьянов Я.И. Пущинский государственный университет, Пущино (Россия), Филиал Учреждения российской академии наук Института биоорганической химии имени академиков М.М. Шемякина и Ю.А. Овчинникова, Пущино (Россия), Республиканский научно-практический центр гематологии и трансфузиологии, Минск (Беларусь).

E-mail: lenabiorobot@yandex.ru Возникновение и развитие опухолей сопровождается различными эпигенетическими изменениями, затрагивающими регуляцию экспрессии множества генов. Исследование роли энзиматического метилирования ДНК в процессе канцерогенеза важно для понимания молекулярно-генетической природы рака и может найти практическое применение в диагностике канцерогенных заболеваний. Проведен анализ уровня метилирования генома человека при развитии различных форм лейкозов. Получены данные об особенностях метилирования отдельных генов (ген кальцитонина человека, MDR-1, p21) и генома в целом у больных лейкемией. Показана обратная зависимость между уровнем метилирования гена MDRи степенью прогрессии хронического миелоидного лейкоза. Установлено повышение уровня метилирования гена кальцитонина на фоне гипометилирования гена MDR-1 при прогрессии заболевания. Показано CpG-гиперметилирование гена p21 при остром миелобластном лейкозе.

Обнаружено, что при лейкозных заболеваниях уровень метилирования последовательностей CCWGG (W – А или Т) гена MDR-1 снижается, в то время как CpWpG-метилирование гена кальцитонина остается неизменным. Полученные данные могут найти применение при совокупной оценке прогноза лейкемий, мониторинге заболеваний, я также в изучении механизмов прогрессии опухолевого процесса при различных формах лейкозов.

Работа выполнена при поддержке грантов РФФИ №08-04-90034 и №09-04-00889.

БЕЛОК FUR - РЕГУЛЯТОР ТРАНСКРИПЦИИ ГЕНА ГЕМОЛИЗИНА II

Галактионова Д.Ю., Солонин А. С.

Институт биохимии и физиологии микроорганизмов им. Скрябина, Пущино (Россия).

E-mail: galaktionova_@bk.ru Патогенные свойства бактерий определяются не только наличием структурных генов, кодирующих факторы патогенности, но в значительной мере обуславливаются их согласованной экспрессией и особым контролем. Такой контроль обычно осуществляется путём регуляции транскрипции в результате связывания регуляторного белка с определенными участками ДНК. Ранее в нашей лаборатории из генома B.cereus были клонированы гены гемолизина II и его регулятора hlyIIR. Перед геном гемолизина II, кроме сайта узнавания для HlyIIR, обнаружен «Fur-box» - участок связывания с регулятором транскрипции Fur (Ferric Uptake Regulator). Этот белок, связываясь с ионами железа, контролирует экспрессию десятков генов у широкого круга микроорганизмов (в том числе - определяющих патогенность бактерий). Подобный контроль обеспечивает адаптивный ответ бактерий на изменение условий окружающей среды. Цель нашей работы определить влияние Fur на транскрипцию гена гемолизина II B. cereus. Структурная часть гена fur была амплифицирована с хромосомы типового штамма B. cereus ATCC 14579 и клонирована в экспрессионный вектор pET29b.

Показано, что белок Fur специфически взаимодействует с промоторно-операторной областью гена гемолизина II и образует ДНК-белковый комплекс. Полученный белок при электрофоретическом разделении визуализировался в виде двух форм с различной электрофоретической подвижностью. Наличие двух форм белка Fur было отмечено ранее в работах посвященных изучению Fur из микроорганизмов семейства Bacillus.

Спектрометрический анализ материала, входящего в состав каждой из этих полос, показал, что они содержат только белок 6His-Fur B. cereus. Известно, что Fur несёт четыре аминокислотных остатков цистеина, которые могут образовывать дисульфидные мостики и тем самым определять пространственную структуру белка, которая выражается в различной электрофоретической подвижности. При восстановлении дисульфидных связей 25mM ДТТ белок переходит в одну форму, обладающую меньшей электрофоретической подвижностью.

ВЫДЕЛЕНИЕ ПОДСЕМЕЙСТВ В СЕМЕЙСТВЕ GH13 ГЛИКОЗИДАЗ

Гизатуллина Д.И., Наумов Д.Г.

Государственный научно-исследовательский институт генетики и селекции промышленных микроорганизмов, Москва (Россия).

E-mail: daniil_naumoff@yahoo.com Семейство GH13 гликозил-гидролаз объединяет почти шесть тысяч белков, среди которых представлены ферменты с более чем 20 различными активностями. В пределах этого семейства в базе данных CAZy (http://www.cazy.org/) выделяют 36 основных подсемейств, а на более высоком иерархическом уровне семейство GH13 вместе с семействами GH70 и GH образует клан GH-H.

Скрининг базы данных GenPept позволил нам обнаружить 9328 белков, содержащих домены семейства GH13. У 22 белков, представляющих семь родов эубактерий, обнаружено по два домена семейства GH13. Ещё у 31 и 3 белков дополнительно обнаружены домены семейств GH77 и GH14, соответственно. Применение недавно разработанной программы PSI Protein Classifier (http://bioinform.genetika.ru/members/Naumoff/PSI_Protein_Classifier.htm) позволило 6302 белка (67,56% от общего числа) на основании значений E-value отнести к 36 ранее известным подсемействам. Некоторые подсемейства оказались эволюционно очень близкими.

Три пары таких семейств – GH13_15/24 (KOG2212), GH13_20/21 и GH13_29/31 – были объединены и дополнительно пополнены за счёт близкородственных белков. Среди оставшихся белков удалось выделить 10 новых подсемейств. Всего в состав подсемейств было включено 7189 белков семейства GH13 (77,07%).

Сравнительный анализ подсемейств семейства GH13 показал, что GH13_25 (KOG3625) и GH13_33 являются наиболее дивергентными, что позволяет их рассматривать в качестве двух самостоятельных семейств в составе клана GH-H.

Итеративный скрининг базы данных с помощью программы PSI-BLAST позволил выявить эволюционные связи белков семейства GH13 с представителями семейств GH31, GH36D, GH70, COG1649 и COG2342. Проведённые нами исследования позволили дополнить иерархическую классификацию гликозил-гидролаз, имеющих каталитический домен с пространственной структурой в виде TIM-бочонка.

ИЗУЧЕНИЕ ОСОБЕННОСТЕЙ АЛЬТЕРНАТИВНОЙ ИНИЦИАЦИИ ТРАНСЛЯЦИИ

ХИМЕРНОГО ГЕНА speA-egfp С ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ САЙТ-НАПРАВЛЕННОГО

МУТАГЕНЕЗА

Глазова О.В., Чернышов С.В.

Самарский государственный университет, Самара (Россия), Филиал Учреждения Российской академии наук Института биоорганической химии им.

академиков М. М. Шемякина и Ю. А. Овчинникова, Пущино (Россия).

E-mail: svch2@rambler.ru Ген speA супрессирует патогенность батерий Erwinia carotovora. Структурная часть гена представляет собой протяженную открытую рамку считывания (ОРС), состоящую из аминокислот. Особенностью данной ОРС является наличие в её пределах 6 кодонов АUG, потенциально претендующих на роль инициирующих. Перед тремя из них (start 2, start 4 и start 6) располагаются пурин-богатые участки, в различной степени обладающие гомологией с последовательностью Шайна-Дальгарно (SD1, SD2 и SD3, соответственно). Три других кодона лишены последовательностей SD. С целью проверки функциональной активности in vivo всех имеющихся SD создан ряд генетических конструкций, где использован ген зелёного флуоресцирующего белка, egfp, в качестве репортерного. Получены экспериментальные данные, свидетельствующие о различной функциональной активности всех трех исследуемых структур. В результате вестерн-блот анализа, проведенного с применением поликлональных антител к GFP, показано наличие ряда сигналов разной интенсивности, соответствующих белкам с различными молекулярными массами. Это свидетельствует об одновременном, но неравнозначном участии в инициации трансляции всех трех структур SD. Показан также факт инициации трансляции со стартовой точки 1, не имеющей перед собой последовательности SD.

Проведен сайт-направленный мутагенез инициирующих кодонов start 2 и start 6 химерного гена speA-egfp с целью их элиминации. В результате получены мутанты с разными вариантами набора потенциальных инициирующих кодонов и разной интенсивностью флуоресценции клеток. Таким образом, у мутантов продемонстрирована различная функциональная активность сигналов инициации трансляции химерного гена speA-egfp.

ИССЛЕДОВАНИЕ РОЛИ ГЕНА ОРНИТИНАМИНОТРАНСФЕРАЗЫ (ОАТ) В

РАЗВИТИИ И СТРЕССОУСТОЙЧИВОСТИ РАСТЕНИЙ

Герасимова С.В., Горелова В.В., Романова А.В., Коваль В.С., Кочетов А.В.

ИЦиГ СО РАН, Новосибирск (Россия).

E-mail: vera-gorelova@mail.ru Пролин является одним из ключевых элементов ответа на стресс у растений. Принято считать, что ген ОАТ является одним из генов синтеза пролина. Вклад гена ОАТ в синтез пролина в норме и при стрессе и связь этого гена со стрессоустойчивостью до сих пор до конца не ясны. Цель работы: исследование роли гена ОАТ в метаболизме пролина и в ответе на стресс у растений. Задачи: получение и исследование растений с повышенной и сниженной экспрессией гена ОАТ, изучение структурно-функциональной организации промотора и транскрипционного контроля гена ОАТ.

Выделены и клонированы последовательности кДНК гена ОАТ Medicago truncatula и фрагмент кДНК ОАТ Licopersicon esculentum, на их основе созданы генетические конструкции для оверэкспрессии (pBi-OAT) и супрессии (pBi-OATas) ОАТ в растениях. Получены трансгенные растения табака, несущие эти конструкции, проведен их молекулярногенетический анализ: показано наличие генетических конструкций в геномной ДНК, подтверждена экспрессия конструкции pBi-OAT. Проведен сегрегационный анализ оверекспрессоров ОАТ в поколении Т1, ведется получение гомозиготных линий. Показано, что оверэкспрессоры OAT демонстрируют повышенную солеустойчивость в поколениях Т0 и Т1.

Показано, что повышенная экспрессия ОАТ не влияет на содержание пролина. Таким образом, экспрессия ОАТ не коррелирует с уровнем пролина, но может влиять на стрессоустойчивость.

С полученными трансгенными растениями ведутся дальнейшие физиологические эксперименты.

Клонирована нуклеотидная последовательности промотора гена ОАТ Arabidopsis thaliana, проведен ее компьютерный анализ. Создана серия из трех делеционных вариантов промотора гена ОАТ, контролирующих экспрессию гена-репортера бета-глюкуронидазы, ведется получение трансгенных растений с этими конструкциями. Планируется изучить стадиеи органоспецифическую индукцию промотора в нормальных и стрессовых условиях.

ОБНАРУЖЕНИЕ И ХАРАКТЕРИСТИКА ГЕНА CYP74 ЛЬНА-ДОЛГУНЦА (LINUM

USITATISSIMUM)

Горина С.С.1, Мухаметшина Н.Е.2, Гоголев Ю.В. Казанский государственный университет им.В.И. Ульянова-Ленина, Казань (Россия), Казанский институт биохимии и биофизики Казанского научного центра РАН, Казань (Россия).

E-mail: luzdeamor@yandex.ru Липоксигеназная сигнальная система играет важную роль в формировании устойчивости растений к патогенам. Ключевым звеном липоксигеназного ферментативного каскада служат цитохромы Р450 семейства CYP74. К основными продуктами их катализаотносятся оксилипины, обладающие широким спекром защитного и регуляторного действия. В листьях льна-долгунца (Linum usutatissimum) сотрудниками Казанского института биохимии и биофизики была обнаружена активность новой дивинилэфирсинтазы и неизвестная ранее группа оксилипинов. В настоящее время известна нуклеотидная последовательность единственного гена алленооксидсинтазы льна, относящегося к обширному семейству CYP74, в связи с чем поиск новых белков и кодирующих их транскриптов и расшифровка их структуры является актуальной задачей.

Нами было проведено выявление, клонирование и определение нуклеотидной последовательности транскриптов, представителей семейства CYP74, из листьев льнадолгунца. Для этого были использованы вырожденные праймеры, комплементарные последовательностям генов представителей семейства CYP74 других растений, филогенетически близких L. usutatissimum.

В транскриптоме листьев льна-долгунца были обнаружены мРНК алленоксидсинтазы и нового неизвестного представителя семейства CYP74, который на основании анализа консервативных доменов кодируемой аминокислотной цепи предположительно можно отнести к гидропероксидлиазам. В тоже время предполагаемый полипептид обнаруживает гомологию с дивинилэфирсинтазой чеснока, относящейся к нетипичным ферментам с рядом необычных ферментативных свойств. В настоящее время нами ведутся работы по гетерологичной экспрессии обнаруженного транскрипта.

ФУНКЦИОНАЛЬНЫЕ ВЗАИМООТНОШЕНИЯ ТАНДЕМНЫХ ПРОМОТОРОВ:

ОСОБЕННОСТИ ИНИЦИАЦИИ ТРАНСКРИПЦИИ В ГЕНЕТИЧЕСКОМ ЛОКУСЕ

Гриценко Е.П., Масулис И.С., Озолинь О.Н.

Институт биофизики клетки РАН, Пущино (Россия), Пущинский государственный университет, Пущино (Россия).

E.mail: HelenGritsenko@rambler.ru Многочисленные попытки компьютерного картирования регуляторных участков в геномах про- и эукариот в последние годы выявили избыточность потенциальных сайтов инициации транскрипции как в межгеннных областях, где присутствие промотор-подобных участков представляется ожидаемым, так и в кодирующих последовательностях генов. Каково биологическое значение этого явления, усложняющего парадигму экспрессии генов, предполагавшую наличие преимущественно одного или двух промоторов, зачастую с близкорасположенными стартовыми точками транскрипции, предстоит выяснить. Недавно было показано, что у эукариот, действительно, происходит множественная инициация транскрипции в области от -250 до +50 относительно инициирующего кодона гена. Для микроорганизмов такой информации до недавнего времени не было. Нами было проведено экспериментальное исследование межгенной области ymjA/sapA с целью выявления всех функционально активных промоторов. Оказалось, что наряду с кластером из трех промоторных участков, расположенных вблизи кодирующей области и в ранней транскрибируемой части гена sapA, неравнозначных по способности инициировать транскрипцию в условиях in vitro, обнаружен дополнительный промотор, с предполагаемой стартовой точкой в положении - относительно 5’ конца гена. Способность данного промотора к образованию открытого комплекса с РНК-полимеразой и инициации синтеза РНК зависит от структурного состояния проксимального к гену промоторного кластера и его взаимодействия с ферментом. Полученные результаты указывают на то, что наличие множественных промоторов может быть биологически целесообразным, в том числе, служить для компенсации возможных мутаций в области иерархически «старшего» и наиболее активного промотора.

Исследования поддержаны грантом РФФИ № 07-04-01066-а

ТРАНСКРИПЦИЯ ЧЕРЕЗ ЭНХАНСЕР ГЕНА WHITE D. MELANOGASTER ВЛИЯЕТ НА

ЕГО АКТИВНОСТЬ

Давыдова А.И., Четверина Д.А., Георгиев П.Г.

Институт биологии гена РАН, Москва (Россия).

E-mail: anya_davydova@mail.ru Транскрипция является важной стадией реализации генетической информации.

Энхансеры – регуляторные ДНК-элементы, активирующие транскрипцию гена. Как известно, большинство энхансеров обладают ткане- и стадио-специфичными свойствами. В последнее время появляется все больше данных, свидетельствующих о том, что важную роль в активности регуляторных элементов и, как следствие, в регуляции экспрессии генов могут играть некодирующие транскрипты. В данной работе проведено исследование влияния проходящей транскрипции на хорошо известный энхансер глаз гена white. Данный регуляторный элемент, как и многие другие энхансеры, обладает коммуникативной активностью: он способен взаимодействовать со специфическим промотором гена white на больших расстояниях. Мы исследовали влияние проходящей транскрипции на работу энхансера глаз, расположенного на разном удалении от промотора гена white. Нами показано, что транскрипция, проходящая через энхансер, нейтрализует его коммуникативную активность, но не влияет на способность энхансера активировать промотор гена на близком расстоянии.

Полученные данные могут помочь разобраться в механизмах регуляции активности энхансеров высших эукариот.

ИССЛЕДОВАНИЕ МЕХАНИЗМА ИНГИБИРОВАНИЯ ТРАНСЛЯЦИИ мРНК YB-1 ПРИ

ЕЕ ПОЛИАДЕНИЛИРОВАНИИ

Елисеева И.А., Лябин Д.Н., Овчинников Л.П.

Институт белка, Пущино (Россия).

E-mail: eliseevaia@rambler.ru Мультифункциональный белок эукариот YB-1 участвует почти во всех ДНК- и мРНК-зависимых процессах в клетке. Ранее в нашей лаборатории было показано, что регуляция синтеза YB-1 in vitro осуществляется через конкурентное связывание YB- (ингибирование трансляции) и поли(А)-связывающего белка PABP (стимуляция трансляции) с регуляторной последовательностью в 3’ нетранслируемой области (3’ НТО) мРНК YB-1. Кроме того, было обнаружено, что полиаденилирование мРНК YB-1 снижает ее трансляционную активность, предположительно за счет образования циклической структуры в 3’-концевой части молекулы мРНК YB-1 (поли(А) - белки лизата ретикулоцитов - регуляторная последовательность в 3’ НТО).

В данной работе мы показали, что (1) ингибирующее действие поли(А)-хвоста на трансляцию мРНК YB-1 не зависит от нуклеотидной последовательности спейсера между регуляторной последовательностью и поли(А)-хвостом, а зависит от его длины;

(2) ингибирование трансляции мРНК YB-1 при ее полиаденилировании наблюдается только на кэпированной мРНК.

С другой стороны, было обнаружено, что eIF4G связывается с поли(А)+ мРНК люциферазы заметно лучше, чем с поли(А)-, благодаря, по-видимому, связанному с поли(А)-хвостом PABP. Однако мРНК YB-1 как поли(А)-, так и поли(А)+ связывает одинаковое количество eIF4G. Кроме того, мы обнаружили специфическое PABP-незавимое взаиможействие eIF4G с 3’ НТО мРНК YB-1.

Полученные результаты должны помочь нам в понимании механизма регуляции трансляции мРНК YB-1.

Работа поддержана грантом РФФИ (07-04-00403-а) и грантами Президиума РАН по программам «Молекулярная и клеточная биология» и «Фундаментальная наука - медицине».

ОСОБЕННОСТИ КАТАЛИЗА РЕКОМБИНАНТНОГО ФЕРМЕНТА

ДИВИНИЛЭФИРСИНТАЗЫ ТАБАКА

Ермилова В.С.1 Осипова Е.В.2, Тарасова Н.Б.2, Чечеткин И.Р.2, Ланцова Н.В.2, Мухитова Ф.К.2, Гоголев Ю.В.2, Гречкин А.Н. Казанский государственный университет, Казань (Россия), Казанский институт биохимии и биофизики, Казань (Россия).

E-mail: ntdes@mail.ru Липоксигеназый путь – один из важнейших метаболических путей в растении.

Продукты липоксигеназной реакции – гидропероксиды жирных кислот – используются разными семействами ферментов, в том числе и дивинилэфирсинтазой (ДЭС), образующей в растении дивиниловые эфиры, которые играют значимую роль в процессах взаимодействия патогена и растения, выступают в качестве сигнальных молекул и обладают защитными свойствами. На сегодня клонированы лишь несколько последовательностей дивинилэфирсинтаз, некоторые из них не охарактеризованы биохимически. Целью данной является определение особенностей катализа рекомбинантного фермента ДЭС табака с разными субстратами, а также потенциально ответственных за катализ аминокислотных остатков активного центра. Для достижения поставленной цели использовалась последовательность 9-ДЭС табака из неэкспресирующегося вектора, любезно предоставленная Ф. Кардинале из университета Турина. Последовательность 9-ДЭС табака была переклонирована в экспрессирующий вектор pET32 EkLIC. Экспрессия целевого белка проводилась с учетом особенностей строения нативного белка. Полученный целевой белок был очищен методом аффинной хроматографии. Проведены инкубации 9-ДЭС табака с 9гидроперекисью линолевой кислоты. Инкубация недавно полученного в нашей лаборатории нового оксилипина - 7-гидроперексида гексадекатриеновой кислоты с ДЭС привела к образованию еще одного ранее неизвестного оксилипина динорколнеленовой кислоты.

Продукты реакции определены с помощью газовой хроматомасс-спектрометрии. Позиции аминокислотной последовательности субстрат-связывающего кармана, которые предположительно ответственны за катализ 9-гидроперекисей до дивиниловых эфиров подвергнуты сай-направленному мутагенезу.

АНАЛИЗ БАРЬЕРНОЙ АКТИВНОСТИ WARI-ИНСУЛЯТОРА D. MELANOGASTER

Ерохин М.М., Четверина Д.А., Георгиев П.Г.

Институт биологии гена РАН, Москва (Россия).

E-mail: yermaxbio@yandex.ru Инсуляторами называют регуляторные элементы в геноме высших эукариот, которые обладают двумя основными свойствами: во-первых, инсулятор, находящийся между промотором и энхансером, способен блокировать активирующее действие энхансера на данный промотор; во-вторых, инсулятор способен предотвращать распространение гетерохроматина.

Последнее свойство инсуляторов получило название барьерной активности. Барьерная активность инсуляторов может выражаться как в способности блокировать репрессионные сигналы, идущие от сайленсеров, так и в свойстве защищать трансгенные конструкции от «эффекта положения». Мы протестировали недавно открытый в нашей лаборатории инсулятор Wari, находящийся непосредственно за геном white у Drosophila melanogaster, на способность блокировать репрессию генов yellow и mini-white, опосредованную известным сайленсером PRE Ubx. Мы показали, что Wari-инсулятор может блокировать действие сайленсера PRE Ubx, причем барьерная активность зависит от расстояния между инсулятором и защищаемым промотором. Методом иммунопреципитации хроматина было показано, что с данным инсулятором in vivo взаимодействуют белки e(y)2, CP190 и Mod(mdg4) 67.2. Более того, мы обнаружили, что мутации по генам e(y)2 и mod(mdg4) 67.2 влияют на способность Wari инсулятора нейтрализовать действие сайленсера, но не играют роли в энхансер-блокирующей активности инсулятора. Таким образом, белки e(y)2 и Mod(mdg4) необходимы для барьерной активности Wari-инсулятора.

ИЗУЧЕНИЕ ПОСТТРАНСЛЯЦИОННЫХ МОДИФИКАЦИЙ МЕТИЛ-ДНКСВЯЗЫВАЮЩЕГО БЕЛКА КАИЗО

Жигалова Н.А., Женило С.В., Прохорчук Е.Б.

Центр «Биоинженерия» РАН, Москва (Россия).

E-mail: nzhigalova@gmail.com Метил-ДНК-связывающий белок Каизо является репрессором, и относиться к BTB/POZ семейству транскрипционных факторов. Каизо содержит два функциональных домена: Nконцевой BTB/POZ домен, принимающий участие в белок-белковом взаимодействии, и Сконцевой домен, состоящий из трех «цинковых пальцев» С2Н2 типа. Анализ образцов ядерных экстрактов клеточной линии HEK 293 в присутствие ингибитора протеаз белка SUMO NEM и в отсутствие ингибитора позволил установить, что метил-ДНК-связывающий белок Каизо подвергается сумоилированию. Мы показали, что Каизо сумоилируется по 42 лизину в BTB/POZ доме. Введение мутации в сайт сумоилирования (К42А) приводит к изменению ядерной локализации белка. Несумоилированная форма Каизо на фоне диффузного ядерного распределения имеет точную ядерную локализацию. Используя, метод метил-зависимого репрессионного теста, мы показали, что несумоилированная форма Каизо не теряет своих свойств транскрипционного репрессора. Более того, добавление в данную модельную систему SUMO приводит к тому, что Каизо, который способен сумоилироваться, перестает быть репрессором, в отличие от несумоилированного Каизо, сохраняющего свои репрессионные свойства. Известно, что репрессионные свойства Каизо основаны в частности на взаимодействии с белковым комплексом ко-репрессором N-CoR. Ко-преципитационный анализ белков показал, что с N-CoR взаимодействует, как сумоилированная форма белка Каизо, так и несумоилированная, как и в случае с белком репрессором группы поликомб BMI1. Тем не менее, данные иммунофлуоресцентного анализа демонстрируют точечную колокализацию в ядре несумоилированного Каизо с BMI1. Таким образом, посттрансляционная модификация сумоилирование, влияет на ядерную локализацию метил-ДНК-связывающего белка Каизо и на его транскрипционную активность.

ВЛИЯНИЕ РАЗЛИЧНЫХ КОНЦЕНТРАЦИИ УГЛЕРОДНЫХ НАНОТРУБОК НА

ЭКСПРЕССИЮ ГЕНОВ В ЛИМФОЦИТАХ ЧЕЛОВЕКА

Жорник Е.В., Баранова Л.А., Емельянова В.П.

Институт биофизики и клеточной инженерии НАНБ, Минск (Беларусь).

E-mail: wico@rambler.ru Нанотехнология, получившая свое развитие в последние десятилетия, представляет собой науку, изучающую свойства материи на наноуровне и разрабатывающую методы использования наноструктур в практике. Нанотехнологии обладают многими преимуществами, однако в связи с возрастающим использованием наноматериалов в практике возникла необходимость изучения риска, связанного с их влиянием на живые организмы.

Известно, что взаимодействие наночастицы с поверхностью клетки приводит к возникновению окислительного стресса, который влечет за собой активацию различных транскрипционных факторов, а это, в свою очередь, приводит к изменению экспрессии генов, ассоциированных с основными клеточными функциями. В этой связи методом ПЦР в реальном времени было изучено влияние различных концентраций многостенных углеродных нанотрубок (УНТ) на экспрессию гена противовоспалительного цитокина Il-10, а также на экспрессию проапоптотического гена Rb в лимфоцитах человека.

Для изучения экспрессии генов в качестве наночастиц использовались многостенные УНТ длиной 0,5-30 мкм различной концентрации. Исследовалось краткосрочное влияние наночастиц на изучаемые гены. В качестве гена внутреннего контроля использовался ген 18S субъединицы рРНК.

В ходе проведения ПЦР в реальном времени было выявлено увеличение экспрессии гена ретинобластомы со временем, однако показано, что меньшие концентрации вызывают отсрочку в изменении уровня экспрессии по сравнению с большими концентрациями. Для гена противовоспалительного цитокина Il-10 наблюдалось уменьшение уровня экспрессии, которое проявлялось тем раньше, чем большие концентрации УНТ использовались.

Результаты экспериментов указывают на способность многостенных углеродных нанотрубок оказывать влияние на экспрессию генов, ассоциированных с важными клеточными функциями.

ИЗУЧЕНИЕ АССОЦИАЦИЙ ПОЛИМОРФНЫХ ЛОКУСОВ ГЕНОВ HTR2C И PDYN С

РАЗВИТИЕМ ОПИЙНОЙ НАРКОМАНИИ

Закиров Д.Ф.1,2, Фасхутдинова Г.Г.2, Хуснутдинова Э.К. Башкирский государственный педагогический университет им. М. Акмуллы, Уфа (Россия), Учреждение Российской академии наук Институт биохимии и генетики УНЦ РАН, Уфа (Россия).

E-mail: zakirov88@yandex.ru Механизмы формирования опийной наркомании – комплексные, причем генетические факторы играют значительную роль в превращении употребления наркотиков в зависимость.

Опиоидный пептид продинорфин играет важную роль в формировании реакции организма на многие опиаты. Предполагается, что полиморфный локус 68 п.н. в гене продинорфина (PDYN) определяет индивидуальную чувствительность к зависимости от наркотиков. Сигнальные механизмы, обусловленные рецепторами 2С серотонина, регулируют форму поведения – зависимость от вознаграждения. Нами проведено исследование двух полиморфных локусов: п.н. VNTR в гене PDYN и Cys23Ser в гене рецептора 2C серотонина HTR2C.

Материалом исследования послужили образцы ДНК 189 мужчин (100 русских и татар), больных опийной наркоманией и 192 здоровых доноров (102 русских и 90 татар).

Анализ генов PDYN и HTR2C был проведён методами ПЦР и ПДРФ. При сравнении частот аллелей и генотипов применялся критерий 2.

Нами было обнаружено, что маркером повышенного риска развития опийной наркомании в совокупной выборке является аллель HTR2C*Ser (OR = 3,91), маркерами пониженного риска – аллель HTR2C*Cys (OR = 0,25) и генотип PDYN*3/*3(OR=0,48). В популяции русских генетическими маркерами повышенного риска развития опийной наркомании являются аллель HTR2C*Ser (OR = 5,85) и генотип PDYN*3/*4 (OR = 1,81), а протективным маркером – аллель HTR2C*Cys (OR =0,17).

Исследование ассоциаций изученных полиморфных локусов является важным для понимания этиопатогенеза формирования опийной наркомании.

ФОРМИРОВАНИE И ПОДДЕРЖАНИИ СИМБИОСОМЫ: УЧАСТИЕ БЕЛКОВ

ЭНДОМЕМБРАННОЙ СИСТЕМЫ КЛЕТКИ-ХОЗЯИНА

Иванов С.Г., Лимпенс Э.1, Федорова Е.Э.1,2, Бисселинг Т. Университет города Вагенинген, Вагенинген (Нидерланды), Институт физиологии растений им. К.А Тимирязева РАН, Москва (Россия).

E-mail: serg.ivanov@rambler.ru Одним из важных источников азота для растений является симбиотическая азотфиксация. Этот процесс осуществляется бактериями Rhizobium находящимися в клетках корневого клубенька в специальных эндосомах (симбиосомах, СБ). В эукариотической клетке мембранная везикула, содержащая бактерию, принадлежит к пути эндоцитоза, и в процессе созревания сливается с вакуолью/лизосомой, удаляя микроорганизм из клетки. Тем не менее, в условиях эффективного симбиоза СБ существуют в виде отдельных эндосом и их слияния с образованием литических вакуолей не происходит. Более того, в процессе дифференциации происходит значительное увеличение поверхности симбиосомной мембраны что предполагает участие в этом процессе клетки-хозяина. Мы полагаем, что специальный статус CБ зависит от белков, находящихся на этой мембране и определяющих ее идентичность в эндомембранной системе клетки-хозяина. Такими маркерами идентичности являются белки, участвующие в процессах слияния мембран с клеточными везикулами (SNAREs), а также малые ГТФазы семейства Rab, регулирующие процесс слияния.

В модельной системе Medicago truncatula - Sinorhizobium meliloti нами была исследована функциональная роль и клеточная локализация маркеров пути эндоцитоза: малых ГТФаз Rab5 и Rab7 и белков "вакуолярного" SNARE комплекса (SYP21/22, SYP51/52, VTI11, VAMP71), а также SNAREs белков-маркеров пути экзоцитоза (VAMP72).

Наши исследования показали, что белки группы MtVAMP72 появляются на мембране СБ начиная с момента проникнования бактерии в клетку, а на более поздних этапах СБ преобретают ряд белков пути эндоцитоза (MtRab7, MtSYP21/22, MtSYP51/52, MtVTI11, MtVAMP71). Таким образом СБ имеет двойную идентичность, т.к. на ее мембране в процессе симбиоза присутствуют белки принадлежащие к пути экзо- и эндоцитоза. При этом роль SNAREs пути экзоцитоза является определяющей для развития симбиоза. РНК интерференция двух из четырех генов MtVAMP72 ингибировала выход бактерий в клетки клубенька и рост CБ.

Мы полагаем что наличие данных белков на СБ создает условия для слияния с везикулами, принадлежащих к пути биосинтеза, и является необходимой предпосылкой для роста СБ. Как компонент пути эндоцитоза, CБ сохраняет статус компартмента, переходного между поздней эндосомой и вакуолью, и приобретает статус вакуоли только в терминальной фазе.

БИОХИМИЧЕСКИЙ И ЦИТОЛОГИЧЕСКИЙ АНАЛИЗ АГРЕГАЦИИ БЕЛКА PrP-GFP

В ДРОЖЖАХ SACCHAROMYCES CEREVISIAE

Игнатова В.В.1, Рубель А.А. 1,2, Магомедова З.М.2, Сайфитдинова А.Ф.1,2, Галкин А.П.1,2.

Санкт-Петербургский государственный университет, Санкт-Петербург (Россия), Санкт-Петербургский филиал Учреждения Российской академии наук Института общей генетики им. Н.И. Вавилова РАН, Санкт-Петербург (Россия).

E-mail: ignatova_vv@mail.ru Прионные болезни, связаны с изменением пространственной структуры белка, получившего название Prion Protein (PrP). Генетические и молекулярные аспекты прионных заболеваний до настоящего времени полностью не изучены, остаются не охарактеризованными факторы, контролирующие прионизацию PrP или блокирующие формирование болезнетворных агрегатов. Дрожжи, как один из самых простых и наиболее изученных генетических объектов, предоставляют уникальные преимущества для поиска факторов, регулирующих прионнную конверсию PrP. На базе дрожжей S. cerevisiae мы создали гетерологичную систему, экспрессирующую гибридный ген, кодирующий белок PrP мыши и зеленый флуоресцирующий белок GFP. Методом флуоресцентной микроскопии мы показали, что продукция белка PrP-GFP приводит к формированию в дрожжевых клетках флуоресцирующих агрегатов различной морфологии тогда как клетки, экспрессирующие только ген GFP, имеют равномерное зелёное свечение. Биохимический анализ агрегатов PrP-GFP показал, что они состоят из небольших полимеров устойчивых к действию протеиназы К, а также к детергентам: SDS и саркозилу.

Сходные биохимические характеристики показывает белок PrP выделенный из мозга больных млекопитающих. Используя флуоресцентные красители специфичные к отдельным клеточным компартментам в сочетании с конфокальной микроскопией высокого разрешения, мы показали, что агрегаты PrP-GFP имеют цитоплазматическую локализацию и не колокализуются с: ядром, митохондриями, вакуолью, эндосомами, аппаратом Гольджи и эндоплазматической сетью, а также с липидами.

Для выполнения исследований был использован конфокальный микроскоп Leica TCS SP5 на базе ЦКП «Хромас».

ИСПОЛЬЗОВАНИЕ МОЛЕКУЛЯРНЫХ МАРКЕРОВ ДЛЯ ИЗУЧЕНИЯ

ПОЛИМОРФИЗМА ДНК ПОПУЛЯЦИЙ ЭФЕДРЫ

Искакова Г.А., Ахметоллаев И.А., ЧиркинА.П., Айтхожина Н.А.

Институт молекулярной биологии и биохимии им. М.А. Айтхожина, Алматы (Казахстан).

E-mail: gulnur.iskakova@list.ru В работе были исследованы представители 7 видов эфедры, собранных в разных географических зонах Республики Казахстан. Межвидовой ДНК полиморфизм выявляли при помощи RAPD-анализа. Число ампликонов в зависимости от использованного праймера составляло от 9 до 25, их размеры варьировали в пределах 100-2000 пн. Два ампликона размерами 100 и 350 пн оказались конститутивными для всех видов эфедры. В ходе работы у видов эфедры были выявлены фрагменты, которые могут рассматриваться как видоспецифические маркеры. У E. monosperma специфическими маркерами выявлены паттерны размером 400 и 450 пн и 130 и 2200 у E. strobilacea. Наибольшее число уникальных фрагментов размерами от 120 пн до 1100 пн, были выявлены для E. distachya. Для E. eguisetina определены три видоспецефичных фрагмента по 150 пн, 250 пн и 3000 пн. На ос-новании полученных данных определена генетическая близость видов Е. interm-edia и E. lamatolepis, которые образуют один кластер с коэффициентом кластерно-го сходства 0.86. Вид эфедры E.

eguisetina оказался генетически наиболее отда-ленным от этих двух видов, имея низкий (0.38) коэффициент. Промежуточное положение занимают E. regeliana (0.73), E. strobilacea (0.63), E.

distachya (0.54) и E. monosperma (0.40). Для определения внутривидового полиморфизма были ис-следованы 5 популяций E. eguisetina. Более сходными по генетической дистан-ции (0.90) были образцы, собранные в разных популяциях, произрастающих в ущелье Теректы.

Распределение коэффициента кластерного сходства с остальны-ми популяциями равен соответственно: горы Тургень – 0.74; горы Кетмень – 0.68; Курдайский перевал – 0.64.

Очевидно, что наименьшая дивергенция по RAPD – маркерам, наблюдаемая в разных популяциях, собранных в ущелье Теректы, связана с общностью происхождения анализируемых популяций.

КЛОНИРОВАНИЕ И ЭКСПРЕССИЯ В E. COLI ГЕНА rpoD СИГМА-СУБЪЕДИНИЦЫ

РНК-ПОЛИМЕРАЗЫ AROBACTERIUM TUMEFACIENS

Канова Е.В.1, Чернышов С.В. Самарский государственный университет, Самара (Россия), Филиал Учреждения российской академии наук Института биоорганической химии им.

академиков М. М. Шемякина и Ю. А. Овчинникова, Пущино (Россия).

E-mail: svch2@rambler.ru Инициация транскрипции генов прокариот – сложный процесс, обеспечиваемый мультисубъединичным ферментом РНК-полимеразой. Существенная роль в специфичности узнавания промоторов принадлежит сигма-субъединеце (у) этого фермента. Целью работы является исследование экспрессии в клетках E. coli репортерного гена зеленого флуоресцирующего белка, поставленного под промоторы Arobacterium tumefaciens, в присутствии и отсутствии у-субъединицы РНК-полимеразы агробактерий. Для этого методом ПЦР при использовании в качестве матрицы геномной ДНК A. tumefaciens был синтезирован ген rpoD у-субъединицы и поставлен под контроль конститутивного и индуцибельного промоторов. В качестве конститутивного был использован промотор PCH, а в качестве индуцибельного промотор фага T7. Осуществлена количественная оценка экспрессии этого гена в клетках кишечной палочки в условиях индукции и без неё. Для дальнейшего проведения экспериментов по комплементации ген rpoD был клонирован в векторах с различными системами репликации на основе плазмид ColE1 и p15. Проведена сравнительная оценка экспрессии гена при использовании этих конструкций. Экспериментально показаны различия в уровнях синтеза у-субъединицы в зависимости от выбора промотора, условий индукции и типа вектора. Оптимизированы условия синтеза этого белка для проведения комплементации между кор-ферментом РНК-полимеразы E. coli и у-субъединицей агробактерий.

ПОВЫШЕНИЕ СОДЕРЖАНИЯ РНК-ПРОДУКТОВ ПОВТОРОВ МОЛОДОГО

СУБСЕМЕЙСТВА AluYb8 В ОПУХОЛЕВЫХ КЛЕТКАХ ЧЕЛОВЕКА K562 ПРИ

АПОПТОЗЕ

Карпачева К.Е., Никитина Т.В., Тищенко Л.И.

Санкт-Петербургский государственный университет, Санкт-Петербург (Россия).

E-mail: tanik@tn3532.spb.edu Методом количественной ОТ-ПЦР в реальном времени получены данные об экспрессии генов разных молодых субсемейств коротких диспергированных повторов SINE – AluY (Ya5, Yb8, Yb9, Y, Yc1, Yg6, Ya4, Ya8) и отдельно генов AluYb8 – в клетках хронической миелогенной лейкемии человека K562 при различных физиологических состояниях. Повторы субсемейств AluYb8 являются одними из многочисленных среди молодых семейств AluY в геноме человека (около 2 тысяч копий). Экспрессия генов оценивалась по содержанию соответствующих РНК в тотальной РНК клеток K562 при пролиферации и апоптозе, вызванном ингибитором топоизомеразы I – камптотецином (в концентрации 4 мкг/мл).

Показано повышение содержания РНК AluYb8 в апоптотических клетках после 2 часов инкубации с камптотецином более чем в 3 раза. Статистически достоверного изменения количества РНК-продуктов семейства AluY не наблюдалось. Это может указывать на более высокий уровень активации транскрипции субсемейства AluYb8 при переходе клеток K562 к апоптозу (по сравнению с другими субсемействами AluY). Дальнейшая инкубация с проапоптотическим агентом приводит к уменьшению содержания всех Alu-РНК. Суммируя эти данные с морфологическими показателями (лестничная фрагментация ДНК и сайтспецифическое расщепление 28S рРНК), мы предполагаем, что индуцированный камптотецином апоптоз в клетках K562 происходит быстрее, чем в ранее исследованных нами клетках гистоцитарной лимфомы человека U937, где увеличение содержания Alu-РНК продолжалось в течение всей 24-часовой инкубации с камптотецином. Возможно, это связано с глобальным гипометилированием генома клеток K562, из-за чего активация экспрессии AluРНК у них происходит быстрее, чем в гиперметилированном геноме клеток U937.

КОДОН-АНТИКОДОНОВОЕ ВЗАИМОДЕЙСТВИЕ ПЕПТИДИЛ-тРНКLYS В А САЙТЕ

70S РИБОСОМЫ, ПРОГРАММИРУЕМЫМ КОДОНОМ AAA ИЛИ AAG

Касацкий П.С., Соболева Н.Г., Катунин В.И.

Петербургский институт ядерной физики РАН, Гатчина (Россия).

E.mail: pavel_kasatsky@inbox.ru Программируемый сдвиг рамки считывания матричной РНК на один нуклеотид в 5'направлении в процессе ее трансляции на рибосоме (-1ПСРС) – это особый механизм трансляционного контроля, который позволяет синтезировать определенное соотношение генных продуктов с двух перекрывающихся рамок считывания в отдельных генах прокариот, ретротранспозонах, мобильных элементах, во многих патогенных РНК-вирусах (коронавирусы, астровирусы, ретровирусы). -1ПСРС обусловлен наличием в мРНК по крайней мере двух важных регулирующих элементов: гептануклеотидной "slippery" последовательности (N-NNXXXY), где происходит сам сдвиг рамки, и расположенной через 6-8 нуклеотидов после нее вторичной структуры мРНК (шпилька или псевдоузел). В настоящее время регулирующие элементы -1ПСРС рассматриваются как возможная мишень антивирусного воздействия.

Предполагается, что для реализации -1ПСРС важное значение имеет стабильность пептидилтРНК в А и Р сайтах рибосомы. Синтез дипептидил-тРНК и определение кинетических параметров взаимодействия проводили в модельной системе, содержащей 70S рибосомы E.coli и короткую синтетическую мРНК: 5’-…AUG-AAA-UUUGUG-3’ либо 5’-…AUG-AAGUUUGUG-3’. мРНК различались только вторым (лизиновым) кодоном. Стабильность дипептидил-тРНК (fМetLys-тРНКLys) в А-сайте 70S рибосомы, программируемым кодонами AAA и AAG, была изучена нами в широком диапазоне концентраций ионов магния и температур. Для диапазона концентраций магния 5-15 мМ полученные Кd для кодона ААА оказались в 2-5 раз меньше, чем Кd для кодона AAG. Следовательно, стабильность fМetLysтРНКLys в А-сайте 70S рибосомы, программируемым кодоном AAA, выше, чем для кодона AAG. Оказалось также, что в формирование комплекса с кодоном ААА вовлечено дополнительных иона магния, а с кодоном AAG - пять. Для кодона AAA величина энтальпии взаимодействия fMetLys-тРНКLys с А-сайтом 70S рибосомы составляла -21 ккал/моль, а для кодона AAG энтальпия оказалась существенно ниже (– 32 ккал/моль). По-видимому, возможность реализации -1ПСРС обусловлена большим сродством дипептидил-тРНКLys к А сайту 70S рибосомы, программируемому кодоном ААА, чем кодоном ААG. В дальнейшем предполагается продолжить изучение взаимодействия дипептидил-тРНКLys с Р сайтом 70S рибосом, программируемым кодонами ААА и ААG.

ВЛИЯНИЕ СТАБИЛЬНОСТИ БЕЛКОВОЙ СТРУКТУРЫ НА ПРОЦЕСС

ОБРАЗОВАНИЯ АМИЛОИДОВ МУТАНТНЫМИ ФОРМАМИ АПОМИОГЛОБИНА

Катина Н.С., Дудина М.А., Балобанов В.А., Ильина Н.Б., Кашпаров И.А., Бычкова В.Е.

Институт белка РАН, Пущино (Россия).

E-mail: delfinium27@rambler.ru Неправильное сворачивание белка и образование амилоидных агрегатов в органах и тканях является причиной возникновения многих серьезных заболеваний человека. Поэтому исследование процесса образования амилоидов и понимание факторов, препятствующих правильному сворачиванию белковой молекулы, являются одной из важных проблем молекулярной биологии и медицины. Для исследования влияния стабильности белка на процесс образования амилоидных структур нами были получены мутантные формы апомиоглобина, различающиеся по стабильности белковой структуры, и исследована их способность к агрегации в условиях, близких к физиологическим, рН 5,5 и температура 400С.



Pages:   || 2 | 3 | 4 |
Похожие работы:

«V Троицкая конференция МЕДИЦИНСКАЯ ФИЗИКА И ИННОВАЦИИ В МЕДИЦИНЕ (ТКМФ-5) 4-8 июня 2012 г. СБОРНИК МАТЕРИАЛОВ ТОМ 2 г. Троицк Московской области 2012 г. ОРГАНИЗАТОРЫ КОНФЕРЕНЦИИ Троицкий научный центр РАН МОНИКИ имени М. Ф. Владимирского Администрация г. Троицка при поддержке Российской академии наук, Российского фонда фундаментальных исследований Министерства образования и науки РФ Правительства Московской области Правительства г. Москвы Ассоциации медицинских физиков России ISBN...»

«Федеральное агентство по образованию ГОУ ВПО Сибирский государственный технологический университет ЛЕСНОЙ И ХИМИЧЕСКИЙ КОМПЛЕКСЫ ПРОБЛЕМЫ И РЕШЕНИЯ Сборник статей студентов и молодых ученых всероссийской научно-практической конференции Том 1 Красноярск 2007 1 Лесной и химический комплексы проблемы и решения: Всероссийская научно-практическая конференция. Сборник статей студентов и молодых ученых. - Красноярск: СибГТУ, Том 1, 2007. – 332 с. Редакционная коллегия: Буторова О.Ф. - доктор...»

«Вестник Томского государственного университета. Филология. 2013. №3 (23) МЕЖДУНАРОДНАЯ НАУЧНАЯ КОНФЕРЕНЦИЯ АКТУАЛЬНЫЕ ПРОБЛЕМЫ МОТИВОЛОГИИ В ЛИНГВИСТИКЕ XXI В. (Томск, ТГУ, 24–26 октября 2012 г.) В Томском государственном университете 24–26 ноября 2012 г. состоялась первая Международная конференция Актуальные проблемы мотивологии в лингвистике XXI в.. Конференция была посвящена 95-летию основания историко-филологческого факультета ТГУ. Организатор конференции – коллектив кафедры русского языка...»

«ФЕДЕРАЛЬНОЕ АГЕНТСТВО ПО ОБРАЗОВАНИЮ УЛЬЯНОВСКИЙ ГОСУДАРСТВЕННЫЙ УНИВЕРСИТЕТ ФИЛОСОФИЯ И МЕТОДОЛОГИЯ НАУКИ МАТЕРИАЛЫ ВСЕРОССИЙСКОЙ НАУЧНОЙ КОНФЕРЕНЦИИ (Ульяновск, 1517 июня 2011) Ульяновск 2011 1 УДК 008 (091)+32.001 ББК 80+60.22.1 г, 87.4 г. Издание частично поддержано грантом РГНФ № 11-13-73003а/В Рецензенты: доктор философских наук, профессор В.А. Бажанов кандидат философских наук, доцент Ю.Ю. Фёдорова Редакторы: доктор философских наук, профессор кафедры философии Ульяновского...»

«Министерство природных ресурсов и экологии РФ Федеральное государственное унитарное предприятие Всероссийский научно-исследовательский институт геологии и минеральных ресурсов Мирового океана им. академика И. С. Грамберга Совет молодых ученых и специалистов при ФГУП ВНИИОкеангеология им. И. С. Грамберга Материалы IV Всероссийской конференции молодых ученых и специалистов Новое в геологии и геофизике Арктики, Антарктики и Мирового океана Санкт-Петербург 16—17 апреля 2014 г. Санкт-Петербург ФГУП...»

«Международная научно-практическая конференция АКТУАЛЬНЫЕ ВОПРОСЫ МОДЕРНИЗАЦИИ НАУКИ 22 МАЯ 2014Г. Г. УФА, РФ ИНФОРМАЦИЯ О КОНФЕРЕНЦИИ Цель конференции: поиск решений по актуальным проблемам современной наук и и распространение научных теоретических и практических знаний среди ученых, преподавателей, студентов, аспирантов, докторантов и заинтересованных лиц. Форма проведения: заочная, без указания формы проведения в сборнике статей; Язык: русский, английский. Шифр конференции: НК- Сборнику...»









 
2014 www.konferenciya.seluk.ru - «Бесплатная электронная библиотека - Конференции, лекции»

Материалы этого сайта размещены для ознакомления, все права принадлежат их авторам.
Если Вы не согласны с тем, что Ваш материал размещён на этом сайте, пожалуйста, напишите нам, мы в течении 1-2 рабочих дней удалим его.