WWW.KONFERENCIYA.SELUK.RU

БЕСПЛАТНАЯ ЭЛЕКТРОННАЯ БИБЛИОТЕКА - Конференции, лекции

 

RU 2 425 880 C2

(19) (11) (13)

РОССИЙСКАЯ ФЕДЕРАЦИЯ

(51) МПК

C12N 15/00 (2006.01)

ФЕДЕРАЛЬНАЯ СЛУЖБА

ПО ИНТЕЛЛЕКТУАЛЬНОЙ СОБСТВЕННОСТИ,

ПАТЕНТАМ И ТОВАРНЫМ ЗНАКАМ

(12) ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ К ПАТЕНТУ

(21)(22) Заявка: 2009129235/10, 30.07.2009 (72) Автор(ы):

Нестерова Анастасия Петровна (RU), (24) Дата начала отсчета срока действия патента: Головатенко-Абрамов Павел 30.07.2009 Кириллович (RU), Платонов Евгений Семенович (RU), Приоритет(ы):

Климов Евгений Александрович (RU), RU (22) Дата подачи заявки: 30.07. Брускин Сергей Александрович (RU) (43) Дата публикации заявки: 10.02.2011 Бюл. № (73) Патентообладатель(и):

(45) Опубликовано: 10.08.2011 Бюл. № 22 Учреждение Российской Академии Наук Институт общей генетики им. Н.И. Вавилова (56) Список документов, цитированных в отчете о РАН (RU) поиске: НЕСТЕРОВА А.П. «Получение трансгенных мышей с микромутацией в гене IGF2 методом электропорации оплодотворенных ооцитов», Вавиловские чтения - 2008, Материалы Международной научно-практической конференции, посвященной 95-летию Саратовского госагроуниверситета, подписано в C печать 01.11.2008, с.284-286. US C A1, 18.04.2002.

Адрес для переписки:

119991, Москва, ул. Губкина, 3, Учреждение Российской Академии Наук Институт общей генетики им. Н.И. Вавилова РАН, А.П.Нестеровой

(54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ТРАНСГЕННЫХ МЫШЕЙ

(57) Реферат: мМ NaCl, 2 мМ HEPES и нуклеиновую кислоту Способ относится к области генной в концентрации 5 нг/мкл, путем создания двух инженерии и биологии развития. Способ серий электрических импульсов с предусматривает трансплантацию зародышей, напряженностью поля 100-200 В/см все клетки которых содержат дополнительную длительностью 750 мс, с интервалом 30 с.

RU генетическую информацию, реципиентной Способ позволяет существенно повысить самке. При этом введение дополнительной количество получаемых трансгенных мышей и генетической информации в одноклеточный сократить сроки их получения. 1 з.п. ф-лы, 1 ил.

зародыш проводят в среде, содержащей.: ru RU 2 425 880 C (19) (11) (13)

RUSSIAN FEDERATION

FEDERAL SERVICE

FOR INTELLECTUAL PROPERTY,

PATENTS AND TRADEMARKS

(12)

Abstract

OF INVENTION

(43) Application published: 10.02.2011 Bull.

(54) METHOD OF PRODUCING TRANSGENE MICE

(57) Abstract: acid in the concentration 5 ng/mcl by generating two

of embryos all cells of which contain the additional EFFECT: method allows substantially increasing

introduction of the additional genetic information in process length.

Предлагаемый способ относится к генной инженерии и может быть использован для создания трансгенных мышей, в геноме которых присутствует искусственно введенная дополнительная генетическая информация (трансген). Предлагаемый способ может быть использован во всех научных исследованиях, посвященных механизмам действия и взаимодействия генов, визуализации экспрессии генов в контексте целого генома у мыши, а также при создании мышиных моделей многих заболеваний человека.

В настоящее время используют несколько способов получения трансгенных мышей: метод пронуклеарной микроинъекции, ретровирусная трансфекция зародышей, оплодотворение трансформированными сперматозоидами, введение в зародыш трансформированных культур эмбриональных стволовых клеток.

Метод пронуклеарной микроинъекции является основным методом получения трансгенных мышей. Трансген вводят в мужской пронуклеус оплодотворенной яйцеклетки мыши при помощи микроинъекционной пипетки, что приводит к хромосомной интеграции трансгена в 10-40% развившихся после процедуры зародышей (Gordon J.W. Gene Transfer in Mouse Eggs. Microinjection and Organelle Transplantation Techniques. P.351-370. Academic Press Inc. (London) Ltd., 1986). Количество трансгенных мышей, родившихся после пересадки зародышей, трансформированных методом пронуклеарной микроинъекции, реципиентным самкам, составляет не более 2% (R.L.Brinster, H.Y.Chen, M.E.Trumbauer, M.K.Yagle and R.D.Palmiter. Factors affecting the efficiency of introducing foreign DNA into mice by microinjecting eggs // Proc.

Nail. Acad. Sci., v.82, p.4438-4442, July, 1985; M.Hirabayashi, R.Takahashi, K.Ito, N.Kashiwazaki, M.Hirao, K.Hirasawa, S.Hichi, M.Ueda. A comparative study on the integration of exogenous DNA into mouse, rat, rabbit and pig genomes // Exp. Anim., v.50 (2), p.125-131, 2001). Несмотря на то что введение чужеродных генов в пронуклеус яйцеклетки обеспечивает наличие трансгена во всех клетках новорожденной мыши, метод пронуклеарной инъекции является трудоемким и требует длительного обучения.

Для получения трансгенных мышей методом ретровирусной трансфекции доимплантационные зародыши культивируют в присутствии вирусных векторов либо производят микроинъекцию клеток, производящих вирусный вектор, в перивителлиновое пространство зародыша (С.Lois, E.J.Hong, S.Pease, E.J.Brown, D.Baltimore. Germline transmission and tissue-specific expression of transgenes delivered by lentiviral vectors // Science, v.295 (5556), 1, p.868-72, 2002). К недостаткам метода относят ограниченную емкость вирусных систем, возможное подавление экспрессии трансгенов и вероятность активации клеточных онкогенов.



Для получения трансгенных мышей также проводят инъекцию модифицированных сперматозоидов в неоплодотворенные яйцеклетки мыши (М.Lavitrano, М.Busnelli, M.G.Cerrito, R.Giovannoni, S.Manzini, A.Vargiolu. Sperm-mediated gene transfer // Reprod.

Fertil. Dev., v.18 (1-2), p.19-23, 2006). Преимуществом метода является возможность использования сперматозоидов после криоконсервации. Однако этот метод связан с 45 трудностями трансфекции сперматозоидов мыши и большим количеством микроманипуляций (Anthony С.F.Perry, Teruhiko Wakayama, Hidefumi Kishikawa, Tsuyoshi Kasai, Masaru Okabe, Yutaka Toyoda, Ryuzo Yanagimachi. Mammalian transgenesis by intracytoplasmic sperm injection // Sceince, v.284, p.14, May, 1999).

Широко используют для получения трансгенных мышей также трансформированные генными конструкциями культуры эмбриональных стволовых клеток мыши. Преимуществом этого подхода является возможность анализа интеграции и экспрессии введенного трансгена непосредственно в культуре клеток.

Линии трансформированных эмбриональных стволовых клеток мыши с оптимальными характеристиками используются для получения химерных зародышей, а впоследствии и мышей, у которых в геном части клеток встроена дополнительная генетическая информация (A.Nagy, E.Gocza, E.M.Diaz, V.R.Prideau, E.I.Makkurla, J.Rossant. Embryonic stem cells alone are able to support fetal development in the mouse // Development, v.110, p.815-821, 1990; A.Bradley, M.Evans, M.H.Kaufman, E.Robertson.

Formation of germ-line chimaeras from embryo-derived teratocarcinoma cell lines // Nature, v.17-23; 309 (5965), p.255-6, May, 1984). Трансформирование эмбриональных стволовых клеток для создания трансгенных мышей проводится различными способами:

микроинъекцией, ретровирусной инфекцией, электропорацией.

В качестве прототипа предлагаемого способа выбран способ получения трансгенных мышей с использованием линии эмбриональных стволовых клеток мыши, трансформированных методом электропорации (Khillan. Jaspal S. (Cherry Hill, NJ). Efficient method for production of compound transgenic animals, United States Patent 6281408, 2001; F.Paul. Lurquin Gene transfer by electroporation // Mol. Biotechnol, v.7(1), p.5Feb, 1997). При помощи электропорации трансген вводят в культуру эмбриональных стволовых клеток мыши. Трансгенные эмбриональные стволовые клетки мыши инъецируют в зародыш мыши, находящийся на стадии морулы или бластоцисты, или смешивают с клетками зародыша. После этого зародыш трансплантируют в матку реципиентной самке. Новорожденные мыши являются химерами и могут нести в себе разное количество трансгенных клеток, развившихся из пересаженных в зародыш трансформированных эмбриональных стволовых клеток.

Наличие трансгена в половых клетках родившихся мышей анализируют в процессе их скрещиваний с мышами дикого типа. Недостаток метода заключается в сложности методики, необходимости поддерживать дорогостоящие линии эмбриональных стволовых клеток мыши и в том, что скрещивания для выведения гомозиготной по вносимому трансгену мыши требуют много времени.

В предлагаемом способе, также как и в прототипе, для получения трансгенных мышей производят манипуляции с зародышами мыши в культуре, после чего зародыши переносят в матку самке и получают новорожденных мышей. Также как и прототипе, в предлагаемом способе трансген в геном клеток мыши вводят при помощи электропорации. Но в отличие от прототипа, в предлагаемом способе электропорации подвергают целиком зародыш мыши на стадии одной клетки. При этом не нужно использовать линии эмбриональных стволовых клеток и травмировать зародыши мыши для получения химер. Так как введение дополнительной генетической информации в предлагаемом способе осуществляется на стадии одной клетки, то новорожденные мыши, в отличие от мышей, получаемых с использованием линии эмбриональных стволовых клеток, будут содержать трансген во всех клетках организма. Поэтому не понадобятся дополнительные скрещивания, которые необходимы для получения трансгенных мышей в прототипе предлагаемого способа.

45 Задачей предлагаемого способа является разработка способа введения дополнительной генетической информации в геном зародыша мыши. Поставленная задача решается тем, что введение дополнительной генетической информации в геном зародыша мыши осуществляется при помощи метода электропорации зародышей мыши на стадии одной клетки.

Сущность предлагаемого способа заключается во введении трансгена в зародыши мыши на стадии одной клетки методом электропорации: до 50 оплодотворенных зародышей мыши помещают в изотонический солевой буферный раствор, содержащий нуклеиновую кислоту в концентрации не менее 5 нг/мкл раствора; электропорацию проводят два раза с интервалом 20-40 секунд, генерируя 3 электрических импульса длительностью 500-1000 мс с напряженностью поля 100-200 В/см. После электропорации зародыши культивируют до стадии бластоцисты. Развившиеся бластоцисты трансплантируют самкам мыши для рождения трансгенных мышей.

Предлагаемый способ позволяет сократить сроки получения трансгенных мышей и значительно повысить их количество.

Предлагаемый способ иллюстрируется следующими примерами.

Пример 1. Оплодотворенные мышиные ооциты F1, полученные от самок СВА и самцов C57BL/6, выделяли спустя 13-15 часов после оплодотворения в фосфатном буфере (раствор Дульбекко), содержащем 250 ед./мл гиалуронидазы, свободные от кумулюсных клеток зародыши отмывали семь раз от гиалуронидазы раствором Виттена. Зародыши трансформировали линейным фрагментом гена Igf2 длиной п.н. с заменой трех нуклеотидов в сайте узнавания рестриктазы StuI (последовательность «AGGCCT» изменена на «AGGGGT»), которая не приводит к изменению аминокислотной последовательности белкового продукта. Для трансформации проводили электропорацию 50 зародышей мыши в 1-мм кювете в мкл раствора, содержащего 200 мкл буферного раствора (150 мМ NaCl и 2 мМ HEPES) и 20 мкл раствора 1 мкг модифицированного фрагмента гена Igf2 в деонизированной воде. Проводили 3 электрических импульса, с напряжением 15 В и длительностью мс с повтором процедуры два раза с интервалом в 30 секунд. Трансформированные зародыши пять раз отмывали свежей средой Виттена и культивировали 4 суток в герметичном флаконе в 500 мкл среды Виттена. Развившиеся бластоцисты трансплантировали в матку ложнобеременным самкам. Наличие модифицированного фрагмента гена Igf2 в геноме новорожденных мышей определяли полимеразной цепной реакцией с рестрикцией. ДНК выделяли из тканей ушной раковины новорожденных мышей, проводили ПЦР с праймерами к фрагменту гена Igf2, содержащему сайт рестрикции StuI, амплифицированный в ходе ПЦР фрагмент подвергали рестрикции рестриктазой StuI. У 48% новорожденных мышей наблюдали после рестрикции и электрофореза наличие трех продуктов в агарозном геле (717 п.н., 426 п.н. и 1143 п.н.), что показывает, что в одном аллеле гена Igf2 отсутствует сайт узнавания рестриктазы StuI, то есть новорожденные мыши являются гетерозиготами по модифицированному фрагменту гена Igf2. Общая эффективность трансгенеза (отношение числа полученных трансгенных мышей к общему числу пересаженных эмбрионов) составила 9,7%.





Пример 2. Выделяли и трансформировали зародыши мыши как описано в примере 1, но в качестве трансгена использовали не линейный фрагмент ДНК, а плазмиду pEGFP-N1, которая несет ген зеленого флуоресцентного белка GFP.

Детекцию последовательности гена EGFP в геноме новорожденных мышей проводили методом ПЦР. ДНК выделяли так, как описано в примере 1. У 29% новорожденных 45 мышей методом электрофореза детектировали продукт реакции - 200 п.н.; отношение числа полученных трансгенных мышей к общему числу пересаженных эмбрионов составило 8,6%. Среди полученного от трансгенных по гену EGFP мышей потомства F2 определяли гомозигот EGFP/EGFP методом ПЦР в реальном времени.

Анализ экспрессии трансгена EGFP у мышей EGFP/EGFP проводили с помощью микроскопического флюоресцентного анализа. Зародыши мышей EGFP/EGFP выделяли и культивировали до стадии бластоцисты как описано в примере 1.

Бластоцисты переносили из среды Виттена в каплю буфера PBS и фотографировали в двух каналах: в проходящем свете (выдержка 50 мс) и в канале GFP (выдержка 100 мс).

У 100% трансгенных бластоцист наблюдали наличие экспрессии белка GFP в виде ярких светлых включений в клетках бластоцист в канале GFP (см. чертеж). На криосрезах тканей печени, мозга и матки самок EGFP/EGFP также наблюдали свечение в канале GFP, что говорит о функциональной активности введенного в геном мыши экзогенного гена EGFP методом электропорации зародышей мыши.

1. Способ получения трансгенных мышей, предусматривающий трансплантацию зародышей, все клетки которых содержат дополнительную генетическую информацию, реципиентной самке, отличающийся тем, что введение дополнительной генетической информации в одноклеточный зародыш проводят в среде, содержащей 150 мМ NaCl, 2 мМ HEPES и нуклеиновую кислоту в концентрации нг/мкл, путем создания двух серий электрических импульсов с напряженностью поля 100-200 В/см длительностью 750 мс, с интервалом 30 с.

2. Способ по п.1, отличающийся тем, что среда для проведения электропорации содержит до 50 оплодотворенных зародышей мыши.



Похожие работы:

«Российская Академия наук Институт лингвистических исследований РАН Российский Гуманитарный Научный Фонд Девятая Конференция по типологии и грамматике для молодых исследователей Посвящается 80-летию В. С. Храковского Материалы Санкт-Петербург 2012 1 СОДЕРЖАНИЕ П. С. Антонова (Москва) Особая группа наречий состояния в русском и польском языках. 6 П. М. Аркадьев (Москва) Неканоническое кодирование объекта при инфинитиве в литовском языке: типология и диахрония О. И. Беляев (Москва)...»

«КАК СТАВИТЬ БЕЗУМНЫЕ ЗАДАЧИ Черновик тезисов доклада How to Formulate Crazy Problems на конференцию ETRIA TRIZ Future Conference 2010, Бергамо, Италия, 3-5 ноября 2010 г. Владимир Герасимов gerasimovladimir@gmail.com Some men see things as they are and say – why? I dream things that never were and say – why not? George Bernard Shaw Некоторые люди видят вещи такими, какие они есть, и при этом еще и спрашивают: Почему? Я размышляю о вещах, которых никогда не было, и при этом спрашиваю: А почему...»

«МИНИСТЕРСТВО ОБРАЗОВАНИЯ И НАУКИ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ ВОПРОСЫ ОБРАЗОВАНИЯ И НАУКИ: ТЕОРЕТИЧЕСКИЙ И МЕТОДИЧЕСКИЙ АСПЕКТЫ Сборник научных трудов по материалам Международной научно-практической конференции 31 мая 2014 г. Часть 3 Тамбов 2014 УДК 001.1 ББК 60 В74 В74 Вопросы образования и наук и: теоретический и методический аспекты: сборник научных трудов по материалам Международной научно-практической конференции 31 мая 2014 г.: в 11 частях. Часть 3. Тамбов: ООО Консалтинговая компания Юком, 2014....»

«Содействие трехсторонним консультациям: ратификация и применение Конвенции № 144 Конвенция 1976 года о трехсторонних консультациях для содействия применению международных трудовых ДЕПАРТАМЕНТ норм (№ 144) ТРУДОВЫХ ОТНОШЕНИЙ (DIALOGUE) ДЕПАРТАМЕНТ МЕЖДУНАРОДНЫХ ТРУДОВЫХ НОРМ (NORMES) Содействие трехсторонним консультациям: ратификация и применение Конвенции № 144 Конвенция 1976 года о трехсторонних консультациях для содействия применению международных трудовых норм (№ 144) ДЕПАРТАМЕНТ ТРУДОВЫХ...»

«ПРИМЕР УСПЕШНОЙ НЕКОММЕРЧЕСКОЙ ОРГАНИЗАЦИИ: ОЦЕНКА И САМООЦЕНКА (АССОЦИАЦИЯ ЖЕНЩИНЫ В НАУКЕ И ОБРАЗОВАНИИ) Винокурова Н. А. (Россия, Москва) В работе рассматриваются критерии успешной деятельности некоммерческих организаций (НКО). Сравниваются западный и российский опыт. В качестве примера успешной российской НКО используется опыт работы Ассоциации Женщины в наук е и образовании. Материалом, иллюстрирующим принципы работы Ассоциации, послужили интервью участников конференций, проводимых...»

«НЕКОММЕРЧЕСКОЕ ПАРТНЕРСТВО НАЦИОНАЛЬНЫЙ ЭЛЕКТРОННОИНФОРМАЦИОННЫЙ КОНСОРЦИУМ (НП НЭИКОН) ИЗДАТЕЛЬСТВО ELSEVIER ПОДГОТОВКА И ИЗДАНИЕ НАУЧНОГО ЖУРНАЛА МЕЖДУНАРОДНАЯ ПРАКТИКА ПО ЭТИКЕ РЕДАКТИРОВАНИЯ, РЕЦЕНЗИРОВАНИЯ, ИЗДАНИЯ И АВТОРСТВА НАУЧНЫХ ПУБЛИКАЦИЙ Руководства Комитета по этике научных публикаций (Committee on Publication Ethics – COPE) и Издательства Elsevier СБОРНИК ПЕРЕВОДОВ МОСКВА • 2013 Подготовка и издание научного журнала. Международная практика по этике редактирования, рецензирования,...»

«МИНИСТЕРСТВО ОБРАЗОВАНИЯ И НАУКИ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ СОВРЕМЕННОЕ ОБЩЕСТВО, НАУКА И ОБРАЗОВАНИЕ: МОДЕРНИЗАЦИЯ И ИННОВАЦИИ Сборник научных трудов по материалам Международной научно-практической конференции Часть III 31 октября 2013 г. АР-Консалт Москва 2013 1 УДК 000.01 ББК 60 С56 Современное общество, наук а и образование: модернизация и инновации: Сборник научных трудов по материалам Международной научно-практической конференции 31 октября 2013 г. В 5 частях. Часть III. Мин-во обр. и науки -...»

«МИНИСТЕРСТВО ЗДРАВООХРАНЕНИЯ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ ФГБУ НАЦИОНАЛЬНЫЙ НАУЧНЫЙ ЦЕНТР НАРКОЛОГИИ МАТЕРИАЛЫ Научно-практической конференции Актуальные вопросы оказания специализированной наркологической помощи населению 1–2 ноября 2012 г. МОСКВА АФФЕКТИВНЫЕ РАССТРОЙСТВА В КЛИНИКЕ АЛКОГОЛИЗМА У ЛИЦ С НЕУСТОЙЧИВЫМИ ЧЕРТАМИ ХАРАКТЕРА В ПРЕМОРБИДЕ Абрамочкина Д.Р. ГБУЗ Областная наркологическая больница 440039, г. Пенза, Заводское шоссе,4 E-mail: klubnichka2485@mail.ru Аффективные расстройства (от...»

«№ 50(256) 16 декабря 2011 О Б Щ Е С Т В Е Н Н О - П О Л И Т И Ч Е С К А Я ГА З Е ТА И З Д А Е Т С Я С 2 0 0 6 ГО Д А Адрес редакции: ул. Ленина, д.33, тел. 310-810 В ЭТОМ НОМЕРЕ! ЗА ПЛЕЧАМИ ТЫСЯЧИ СПАСЕННЫХ ЖИЗНЕЙ Протвинскому Пресс-конференция здравоохранению исполнилось 50 лет В области подвели итоги ПОРА РАЗОРВАТЬ ВЫБОРОВ ЗАКОЛДОВАННЫЙ КРУГ Интервью с Главой города 9 декабря в Доме Правительства Московской области состоялась пресс-конференция председателя избирательной комиссии Московской...»

«МИНИСТЕРСТВО ОБРАЗОВАНИЯ И НАУКИ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ ВОПРОСЫ ОБРАЗОВАНИЯ И НАУКИ: ТЕОРЕТИЧЕСКИЙ И МЕТОДИЧЕСКИЙ АСПЕКТЫ Сборник научных трудов по материалам Международной научно-практической конференции 31 мая 2014 г. Часть 11 Тамбов 2014 УДК 001.1 ББК 60 В74 В74 Вопросы образования и наук и: теоретический и методический аспекты: сборник научных трудов по материалам Международной научно-практической конференции 31 мая 2014 г.: в 11 частях. Часть 11. Тамбов: ООО Консалтинговая компания Юком,...»

«203 УДК 543 Основные тенденции развития хроматографии после 110-летия со дня ее открытия М.С.Цветом Яшин Я.И., Яшин А.Я. ООО Интерлаб, Москва Поступила в редакцию 14.03.2014 г. Аннотация На основании анализа материалов конференций и симпозиумов по хроматографии за 2010г.г., а также анализа публикаций (обзоров и статей) выявлены основные направления развития методов и аппаратуры для хроматографии, а также их новые области применения. Ключевые слова: ВЭЖХ, ГХ, МС, детектор, сорбенты, колонки On...»

«Главные новости Риека, 19 августа 2010 года Украину хотят выгнать из ГУАМ В Грузии и Молдове размышляют над тем, не заменить ли в ГУАМ Украину на Беларусь, сообщает издание Сегодня. Полумертвый союз Грузии, Украины, Азербайджана и Молдовы (ГУАМ) может быть реанимирован благодаря замене игрока - Украины. Российская пресса выдвинула интересную версию относительно его будущего: Беларусь может войти в ГУАМ, заменив там нашу страну. Мол, Виктор Янукович не питает особых симпатий к ГУАМ, посему его...»

«ICCD/COP(11)/19 Организация Объединенных Наций Конвенция по Борьбе Distr.: General с Опустыниванием 4 July 2013 Russian Original: English Конференция Сторон Одиннадцатая сессия Виндхук, Намибия, 1627 сентября 2013 года Пункт 14 предварительной повестки дня Десятилетие Организации Объединенных Наций, посвященное пустыням и борьбе с опустыниванием (20102020 годы) Доклад о деятельности в целях поддержки Десятилетия Организации Объединенных Наций, посвященного пустыням и борьбе с опустыниванием...»

«Вакцинация против вирусных гепатитов А и В у пациентов с хроническими гепатитами вирусной этиологии Профессор Сергей Л. Мукомолов Санкт-Петербургский Институт Пастера Гепатологическая конференция с международным участием Белые ночи Июнь 2013 год Санкт-Петербург Выступление спонсируется компанией ГлаксоСмитКляйн. Информация, включенная в презентацию, отражает мнение автора и может не совпадать с позицией ГлаксоСмитКляйн. Компания ГлаксоСмитКляйн не несет никакой ответственности за любые...»

«Хищные птицы в динамической среде ІІІ тысячелетия: состояние и перспективы СРАВНИТЕЛЬНЫЙ АНАЛИЗ НАСЕЛЕНИЯ СОКОЛООБРАЗНЫХ РАЗНЫХ ПРИРОДНО-ЛАНДШАФТНЫХ КОМПЛЕКСОВ ИВАНОВСКОЙ ОБЛАСТИ В.Н. Мельников Ивановский государственный университет (Россия) ivanovobirds@mail.ru The comparative analysis of Falconiformes populations in the territories of different landscape complexes of Ivanovo region. – Melnikov V.N. – The information on estimation of the birds of prey species number in 20 stationary...»

«УТВЕРЖДЕН Министром торговли Республики Беларусь В.С. Чекановым 20 ноября 2012 г. КАЛЕНДАРЬ ИНОСТРАННЫХ, МЕЖДУНАРОДНЫХ И РЕСПУБЛИКАНСКИХ ВЫСТАВОК (ЯРМАРОК), ОРГАНИЗУЕМЫХ В РЕСПУБЛИКЕ БЕЛАРУСЬ В 2013 ГОДУ I. ИНОСТРАННЫЕ ВЫСТАВКИ (ЯРМАРКИ). _ _ _ _ _ _ _ _ II. МЕЖДУНАРОДНЫЕ ВЫСТАВКИ (ЯРМАРКИ). № Название выставочного Тематика Дата Место Организатор Контактный Адрес сайта и п/п мероприятия проведения проведения телефон электронной почты Оборудование и машины для лёгкой промышленности. Обувь, г....»

«Исполнительный совет 194 EX/5 Сто девяносто четвертая сессия Part I ПАРИЖ, 3 марта 2014 г. Оригинал: английский/ французский Пункт 5 предварительной повестки дня Выполнение решений и резолюций, принятых Исполнительным советом и Генеральной конференцией на предыдущих сессиях Часть I Вопросы, касающиеся программы РЕЗЮМЕ Настоящий доклад предназначается для информирования членов Исполнительного совета о прогрессе, достигнутом в выполнении решений и резолюций, принятых Исполнительным советом и...»

«Труды VI Международной конференции по соколообразным и совам Северной Евразии СОВЫ ВОЛЖСКО-КАМСКОГО КРАЯ (РАСПРОСТРАНЕНИЕ, ЧИСЛЕННОСТЬ, ХАРАКТЕР ПРЕБЫВАНИЯ) А.И. Шепель Пермский государственный национальный исследовательский университет (Россия) shai53@mail.ru The owls of the Volga-Kama area (distribution, number, status). – Shepel А.I. – Among 14 owl species of the Volga-Kama area the Snowy Owl is detected on the autumn-winter migrations, the Barn Owl is a nomadic species. The Eagle Owl,...»

«ORIFLAME ПЛАН УСПЕХА 514859 ИЗДАНИЕ ДЛЯ ЛИДЕРОВ 2 3 СОДЕРЖАНИЕ 09 Твои Мечты – Наше Вдохновение 11 Это Орифлэйм 12 Орифлэйм в цифрах и фактах 13 Что мы предлагаем 16 Как показывать каталоги и принимать заказы 18 Концепция бизнес-возможностей Орифлэйм 22 Станьте успешным Лидером с Орифлэйм! 26 Система ПРО. Быстрый рост с Орифлэйм 32 Трехуровневая система 35 Создаем и развиваем команду 40 Планируем и организуем бизнес 42 Онлайн-поддержка бизнеса Орифлэйм 46 Академия Орифлэйм 50 Возможности дохода...»

«1 Выпуск № 8 /2013 СОДЕРЖАНИЕ НОМЕРА СОДЕРЖАНИЕ НОМЕРА ОДЕРЖАНИЕ НОМЕРА КОЛОНКА ГЛАВНОГО РЕДАКТОРА.. 3-4 ДНЕВНИК СОБЫТИЙ:.. 5-6 Обращение о необходимости проведения Съезда фармацевтических работников.. 5-6 ААУ СОЮЗФАРМА ИНФОРМИРУЕТ Круглый стол РИА АМИ Диалог и партнерство как ключевой фактор развития российского здравоохранения.. 7-8 10 горячих вопросов министру здравоохранения Скворцовой В.И... 8-11 ДАЙДЖЕСТ СМИ ЗА АВГУСТ.. 12- Зарубежные новости.. ОСОБОЕ МНЕНИЕ:.. 21- Члена Комитета...»









 
2014 www.konferenciya.seluk.ru - «Бесплатная электронная библиотека - Конференции, лекции»

Материалы этого сайта размещены для ознакомления, все права принадлежат их авторам.
Если Вы не согласны с тем, что Ваш материал размещён на этом сайте, пожалуйста, напишите нам, мы в течении 1-2 рабочих дней удалим его.